冰冻切片制作与染色过程中常见问题与处理.pptVIP

（3）所有切片背景过深 ① 内源性过氧化酶没有完全阻断 ② 切片或涂片过厚 ③ 漂洗不够 ④ 底物呈色反应过久 ⑤ 蛋白质封闭不够或所用血清溶血 ⑥ 使用全血清抗体稀释不够 * （4）阳性对照染色良好，检测的阳性标本呈阴性反应。最常见的原因是： 标本的固定和处理不当 * 最后一个细节：PBS洗液的PH和离子强度 建议PH在7.4-7.6，浓度是0.01M 中性及弱硷性条件（PH=7-8）有利于免疫复合物的形成 酸性条件则有利于分解 低离子强度有利于免疫复合物的形成 高离子强度则有利于分解 * 谢 谢！ * 冰冻切片制作与染色过程中常见的问题 夏春梅 cmxia@fudan.edu.cn * 问题思考 组织是否足够新鲜？1w以内？ 灌注固定液、洗液PH值、离子浓度是否合适？ 一抗是选择途径，滴度如何确定的？ 是否阅读过DATASHEET? 保存，有效期，reactivity, Cross-Reactivity ？ 对该蛋白表达和分布有无预期的估计和了解? 是否设了阳性和阴性对照？ 是否排除了自发荧光？ 是不是判读正确？ * 一、冰冻切片的优缺点 优点： 简便，快速，用时短 可以不需要对组织固定、脱水、透明、包埋 组织变化不大 能很好保存脂肪，类脂 能够比较完好地保存各种抗原活性及酶类 对有机溶剂或热的温度耐受能力较差的细胞膜表面抗原和水解酶保存较好。 缺点：