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?光学显微镜技术 (light microscopy) ?电子显微镜技术 (Electro microscopy) ?扫描探针显微镜 (Scanning Probe Microscopy) （1）结 构 ①光源：高压汞灯 ②激发滤色镜：吸收长波长的光，通过 短波长的激发光。 ③阻断滤色镜：吸收残余的短波长的激 发光。 ④分色镜系统：反射短波长的光线，透 过长波长的光线。 当电子束透射样品时，由于样品不同部位对电子具有不同散射度，而形成不同电子密度差的高度放大图像显示在荧光屏上。 目前透射电子显微镜的分辨率为0.1 nm～0.3 nm，放大倍数可达百万倍，已能在电镜照片上看到生物大分子的粗糙轮廓。 扫描电镜的电子束不穿透样本，仅在样品表面进行“栅状扫描”，激发样品表面产生二次电子，其多少与电子束的投射角及样品表面的起伏形态相关。二次电子被收集变成光信号后在荧光屏上显示出样品表面的立体图像。 扫描电镜的分辨率不及透射电镜，只有3 nm左右，但所形成的图像富有三维立体感，而且样品制备简单，不需做超薄切片。 1.离心分离技术Centrifugal Separation 依据细胞各组分比重和大小在同一离心场内的沉降速度不同，将细胞内各组分分级分离出来的技术。它包括差速离心和密度梯度离心 常用于分离细胞器与生物大分子及其复合物。 是指由低速到高速逐级沉降分离。先在低速离心条件下把大的颗粒沉降到管底，其他颗粒留在上清中；然后再以较高的离心速度，把较大的颗粒沉降的管底；继续加大离心力，可分离出较小颗粒。这种方法适合大小差别较大的颗粒的分离，如细胞器的初步离心分离。 密度梯度离心density gradient centrifugation 是用一定的介质（如甘油、蔗糖、氯化铯）在离心管内形成连续或不连续的密度梯度，并通过重力或离心力使铺放于溶液表面样品中的组分以不同速率沉降，使其分层分离。 包括速度沉降和等密 度离心两种方式。 将固体颗粒填充于塑料或玻璃柱中形成固定相，混合液加到柱子上。然后，根据物质的不同成分在柱子上的滞留程度及从柱子底部流出的时间的不同，将物质洗脱下来的过程。可根据不同分离分子的需求，选择不同孔径的凝胶颗粒。 凝胶过滤层析；离子交换层析；亲和层析。 需借助高压液相色谱仪完成，核心部件是耐高压色谱柱。固定相充填物为3 μm～10 μm的微小球形树脂或硅胶，流动相需要压力达150 kpa～35000 kpa。 这些微小颗粒有惰性、多孔性和比表面积大的特点，极大的提高了分辨率。另外，填充颗粒表面还可用化学偶联各种基团（如磷酸基、羟甲基、苯基、氨基等），可对结构和功能不同的物质进行分离。 具有高分辨率、高灵敏度、速度快、柱可反复利用，流出组分易收集等优点。 酶细胞化学技术 免疫细胞化学技术 放射自显影技术 活细胞内分子示踪 4.流式细胞技术 用氩离子发出的激光束，通过调节液压，迫使悬浮细胞排成单列移动。当细胞通过检测区时，细胞被激光束照射而发出散射光或一定强度的荧光，经仪器可逐个对细胞的散射光和荧光强度进行检测，并由电子控制台放大和显示。 流式细胞仪可分选出高纯度的细胞亚群，分离纯度可达99%。 是一种对特定的DNA片段在体外进行快速扩增的方法。它利用DNA半保留复制原理，通过控制实验温度，使DNA处于“变性-复性-合成”的反复循环中。 它最早是由美国Cetus公司人类遗传研究室的kary Mullis及同行于1985年发现和研制成功，并因此获得1993年的诺贝尔化学奖。 2.基因芯片 又称DNA芯片、DNA微阵列，是生物芯片中发展最成熟以及最先进入应用和商品化的领域。 基因芯片技术是指将大量（点阵高于400/cm2）特定的寡核苷酸片段或基因片段作为探针，有规律地排列固定于支持物上，产生二维DNA探针阵列，然后与标记样品的基因按碱基配对原理进行杂交，通过检测杂交信号强度获取样品分子的数量和序列信息，进而实现对生物样品快速、并行、高效地检测或医学诊断。 3.RNA干扰技术 RNAi现象是Rich Jorgensen等