第17章高效毛细管电泳课题.pptVIP

第十七章 高效毛细管电泳分析法 一、基本装置与原理 * 高效毛细管电泳（high performance capillary electrophoresis，HPCE）是近年来发展起来的一种高效、快速的分离分析技术，是经典电泳技术和现代微柱分离相结合的产物。HPCE已成为一种重要的分离分析方法，在生物、医药、化工、环保、食品等领域具有广阔的应用前景。 总的说来，HPCE具有如下优点： 1. 高灵敏度 采用电化学检测器，最低检测限可达10-19 mol； 2. 高效 HPCE每米理论塔板数为几十万，高者可达几百万甚至几千万； 3. 高速 通常的分析时间不超过30 min。有1.7 min内分离19种阳离子及3 min内分离30种阴离子的报道； 4. 样品用量少 只需nL（10?9 L）级； 5. 低消耗 每次分析只需少量（几毫升）流动相，分析过程是在价格低廉的毛细管柱中进行； 6. 应用范围广 从简单的无机离子、有机离子到整个细胞，都可进行分离分析。具有“万能”分析功能或潜力； HPCE是以高压电场为驱动力，以毛细管为分离通道，依据样品中各组分之间淌度和（或）分配系数的不同而进行分离的一类新型液相分离技术。 毛细管电泳一般由一个高压电源，一根毛细管，一个检测器及两个缓冲液贮液槽及数据记录系统组成，其仪器结构示意图如图 1 2 3 4 6 5 5 图1 毛细管电泳装置示意图 1．高压电源 2．检测器 3．液冷温控毛细管 4．数据记录系统 5．缓冲液槽 6．缓冲液 1.基本装置 HPCE的仪器结构比HPLC仪简单，有高压直流电源，进样装置，毛细管和检测器。前三个部件均易实现，但由于HPCE采用了极小内径的毛细管，进样量很小，因此只有具有高灵敏度的检测器，才能进行定性、定量分析。检测器是HPCE仪的关键部件。 HPCE检测器中应用较广泛的是紫外-可见检测器和电化学检测器。迄今为止，除了原子吸收光谱、电感耦合等离子体发射光谱（ICP）及红外光谱未用于HPCE外，荧光、电化学、质谱、激光类和其他类型检测器（如折射率检测器、同位素检测器等）均已应用。 目前应用较多并且已经商品化的是光学检测器（紫外检测器和荧光检测器）和电化学检测器（电导和安培）。电化学检测器由于其灵敏度高、价廉、应用范围广，应用比较多。HPCE-MS联用提供了一种分离和鉴定相结合的强有力的技术，将成为最有发展前途的技术之一。 2．基本原理 在电解质溶液中，带电粒子在电场作用下，以不同速度向其所带电荷相反方向迁移的现象称为电泳。电渗流（electroosmoticflow，EOF）是指管内溶液在外力电场作用下整体向一个方向运动的现象。 HPCE通常采用的是石英毛细管柱，一般情况下（pH＞3），硅醇基（—SiOH）电离为硅氧基负离子（—SiO?），使管壁表面带负电，为了保持电荷平衡，溶液中水合离子（一般为阳离子）被吸附到表面附近，形成双电层。 当在毛细管两端加高电压时，双电层中的阳离子向阴极移动，由于离子是溶剂化的，所以带动了毛细管中溶液整体向阴极移动，产生电渗流。在不少情况下，电渗流的速度是电泳流速度的5～7倍。 溶液中同时存在泳流和渗流，在不考虑相互作用的前提下，粒子在毛细管内电解质中的运动速度应当是电泳流速度（ ）和电渗流速度（ ）的矢量和，即 式中，E为电场强度，μ为淌度。正离子的运动方向和电渗流一致，因此最先流出；中性粒子的电泳流速度为“零”，其移动速度相当于电渗流速度；而负离子的运动方向和电渗流方向相反，但因电渗流速度一般都大于电泳流速度，故它将在中性粒子之后流出，各种粒子的分离情况见图 + ? - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 图2 毛细管分离示意图 在HPCE中电渗流的一个重要特点是具有平面流型，电渗的驱动力沿毛细管均匀分布，它使整个流体象一个塞子一样以均匀的速度向前运动。而在HPLC中流体流型则是抛物线型的层流，其中心处速度是平均速度的2倍。 电渗流的平面流型和HPLC中高压泵驱动所产生的抛物线型层流的速度曲线不同，不会直接引起样品组分区带在柱内扩张，这是HPCE获得高效分离的重要原因之一。 HPCE是指所有在极细毛细管内进行的电泳新技术，它根据分离机理不同，具有多种分离模式，能够提供多方面的信息。HPCE常用的分离模式包括： 二、常用分离模式 又称自由溶液毛细管电泳，是毛细管电泳中最基本、应用最广泛的一种分离模式。在毛细管中仅填充缓冲溶液，基于溶质组分的迁移时间或淌度的不同而分离。前述基本原理即为CZE的基本原理。 1．毛细管区