2-DEAE纤维素梯度层析课件课件.pptVIP

DEAE — 纤维素梯度层析实验 一 实验原理 DEAE-纤维素是以纤维素为母体接有二乙基氨基乙基（DEAE）活性基团的 弱碱性阴离子交换剂,它在离子交换层析中可用于蛋白质、核酸、激素、酶等 大分子的分离与纯化。对于某些组分比较复杂或性质比较相近的蛋白质样 品。在采用一般的恒溶剂系统进行离子交换柱层析时，往往不容易分离，这 时可采用梯度洗提（装置见图1-2）。即用一定的样品离子在不同的离子强度 （或pH）溶液中对一定的离子交换剂的平衡常数不同，在洗提过程中，通过 不断改变洗提的离子强度pH不变）[根据实验的具体情况，也可同时改变离子 强度和pH]，以逐步改变样品中各组分与离子交换剂的交换能力，最后得到分 离，这种层析方式即称为梯度洗提层析。洗提剂的梯度产生如图所示，当 A1=A2时，产生线形梯度；当A1A2时，产生凹型梯度；当A1A2时，产生凸型 梯度。不同的样品，应根据实验情形，选择合适的梯度洗提曲线（见附1） 。 梯度洗脱示意图 二 实验目的与要求 通过DEAE-纤维素阴离子交换剂，采 用一条线型离子强度和恒定pH洗提曲线， 对鸡蛋白蛋白（CEA）粗制样品进行分级 分离，以了解梯度洗提的层析方法。 三 实验主要器材与装置 3-1、实验仪器 （1）、色谱工作站及装置 （2）、笔记本电脑 （3）、紫外检测仪