毛细管电色谱-上海市药学会.ppt

SDS胶束示意图 毛细管电动色谱 MECC的两相 在MECC系统中，存在着两相：流动的缓冲液相；相当于固定相作用的胶束相。 对于SDS胶束来说，固定相朝阳极迁移。电渗流的速度大于胶束的迁移速度，胶束最终向阴极移动，但移动非常慢。因此，MECC中的“固定相”是移动的,又被称为“准固定相”。 溶质在这两相之间分配而分离。 毛细管电动色谱 在SDS-MECC中，中性粒子根据本身疏水性的不同而达到分离。疏水性强的作用力就大，其留在胶束中的时间就长。因胶束的绝对速度很小，故组分的迁移时间就长，反之组分较多地停留在缓冲液这按电渗的速度移动，因此，迁移时间较短。 如果使用阳离子表面活性剂，则情况相反。 毛细管电色谱 毛细管电色谱（CEC）是指用电场驱动的微柱液相色谱，它克服了CE分离中性物质相对困难的不足，同时也大大地提高了液相色谱的分离效率，形成了自己独特的高效、微量、快捷的特点。 毛细管电色谱 CEC采用熔融的石英毛细管柱，柱内一般填充高效液相色谱（HPLC）用的固定相，用高压直流电源代替高压泵，即用电渗流代替压力推动流动相。溶质根据它们在流动相与固定相中的分配系数的不同和自身电泳淌度的差异得以分离。 毛细管电色谱 溶质在毛细管电色谱中的保留是与它在两相中的分配有关，决定了CEC实质是一种色谱行为。但当溶质为离子状态时，其保留机制又类似于毛细管电泳，即根据其电泳淌度的不同而分离。因此，CEC在选择性和使用范围上兼顾了CE和高效液相色谱的特点。 毛细管电泳特点及应用 一、毛细管电泳的技术特点 多——分离模式多 快——分析速度快 好——分离效能好 省——分析费用省 七种青霉素的分离 CZE : 20mM Pi-Borate, pH 8.5 (B) MEKC : 0.1 M SDS in (A) soln. CZE分离RP-HPLC收集的多肽组分 毛细管电泳特点及应用 二、毛细管电泳的应用特点 生物大分子 有机小分子 无机离子 中西药物 生化样品 手性分子 蛋白质混合物的毛细管等电聚焦分离 阳离子分离毛细管电泳图 违禁药物毛细管胶束电动色谱分离 毛细管电泳特点及应用 三、毛细管电泳在药学研究中的应用热点 复杂样品指纹图谱 手性分离分析 药物代谢研究 药品质量研究及标准制订 中药指纹图谱研究 CE虽然用于中药指纹图谱研究尚处于起步阶段，用CE分析中药具有较大的优势。一是它具有柱效高、快速、进样体积小等特点；二是抗污染能力强，前处理简单，甚至于不需前处理（适用于“脏”样品分析）；三是分析运行成本低；四是水溶性样品的“指纹”特征性强，如中药汤剂、注射剂的分析等；五是应用面广。CE除可分析小分子酸、碱、盐及中性分子外，还可分析生物大分子（核酸、多肽和蛋白质等）及手性分子等。因此，CE可以完成中药指纹图谱研究的诸多课题。 冬虫夏草的毛细管电泳指纹图谱 手性分离分析 手性对映体分离有巨大的应用价值，用CE直接分离手性对映体是发展方向。 目前在机理上已提出手性对映体分离的数学模型，可用多种模式进行分离。 常用的手性选择剂有环糊精、冠醚、手性选择性金属络合物、胆酸盐、手性混合胶束、蛋白和糖等。 山莨菪碱合成品的毛细管电泳手性拆分 未涂层石英毛细管柱( 5 0 μ m ×4 5 cm)，运行缓冲液 7 5mmo l /L磷酸盐缓冲液 (pH2.5，含25 mmol /L CM- γ -CD)，运行电压20kV，毛细管柱温 25℃，电迁移进样 8kV×6s，检测波长 200 nm 药物代谢研究 生物体液药物分析及代谢物研究是临床药代动力学的重要内容，而代谢物的结构一般与原药很相似，需要很高的分辨率才能达到分离测定的目的。 CE具有分离效能高、所需样品量少等优点，且通过电迁移进样、清洗毛细管柱等方式使得CE特别适于分析生物体液“脏”样品，因此CE广泛应用于研究药物的代谢过程、测定代谢产物、分析各种体液中的药物成分及其分布等领域。此外，结合CE灵活的手性分离模式，近几年CE在生物体液中手性药物代谢研究方面的应用进展迅速。 延胡索乙素硫酸盐的CE手性分离及其家兔体内立体选择性代谢研究 药品质量研究与标准制订 “化学药物杂质研究的技术指导原则”：新药的CE杂质谱 BP201