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红景天苷含量测定方法 培训资料 西藏金稞集团有限责任公司 目 录 一、高效液相色谱法 1 二、RP-HPLC法 2 三、气相色谱法 4 四、薄层-紫外分光光度法 4 五、薄层扫描法 6 六、分光光度法 7 七、毛细管电泳法 8 八、重氮化比色法 9 红景天为景天科植物大花红景天Rhodiola?crenulata（Hook.f.et. Thoms.）H.Ohba的干燥根及根茎，具有抗衰老、抗缺氧、抗疲劳、抗病毒和抗肿瘤等作用。红景天苷是红景天的主要成分，具有多方面的药理活性，因此，将红景天植物药材中红景天苷含量的高低做为判断其药材质量优劣好坏的标准。2005版《中国药典》采用高效液相色谱法测定红景天苷的含量，另外还有紫外分光光度法、薄层扫描法等测定方法。 一、高效液相色谱法 1、仪器 Waters高效液相色谱仪(2996DAD检测器、2695泵、自动进样器、Empower化学工作站)、液相色谱柱(SymmetyShied RP185μl，4.6X250mm)。 2、试剂 红景天苷对照品由中国药品生物制品检定所提供，其他化学试剂均为分析纯。 3、色谱条件 色谱柱：SymmetyShied RP185μl，4.6X250mm； 流动相：甲醇-水(15：85)； 流速：1 mL／min； 进样量：10μl； 检测波长：222 nm； 柱温：30 ℃ 。 4、含量测定 4.1 红景天苷标准品溶液的配制 精密称取红景天苷标准品10mg，于50 mL容量瓶中制成0.2mg／mL的甲醇溶液，微孔滤膜(0.45μm)过滤，即得标准品溶液，根据需要稀释成不同浓度。 4.2 供试品溶液的配制 精密称取红景天苷供试品10mg，于50 mL容量瓶中制成0.2 mg／mL的甲醇溶液，微孔滤膜(0.45μm)过滤，取续滤液，即得供试品溶液。 4.3 标准曲线的绘制 分别精密吸取1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 mL标准样溶液于10 mL容量瓶中用甲醇稀释至刻度，摇匀。上述浓度的标准品溶液分别以l0μl进样，以峰面积(Y)与红景天苷标准品浓度(X)绘制标准曲线。 4.4 样品的含量测定 分别精密吸取供试品溶液l0μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，计算红景天苷含量。?? 二、RP-HPLC法 1、仪器与试药 LC-10A液相色谱仪，LC-10AT输液泵，SPD-10A紫外可见检测器，DL-180超声仪。 甲醇(色谱纯)，乙腈(色谱纯)，水(二次重蒸水)，红景天苷对照品(中国药品生物制品检定所)，其他试剂均为分析纯。 2、色谱条件 色谱柱：Kromasil C18柱(5.0μm，4.6 mm×150.0 mm)，流动相：水-乙腈-磷酸(体积比为93.0：7.0：0.2)，流速：1.20 mL·min-1，检测波长：223 nm，柱温：30℃ 。 3、试验方法 3.1 标准曲线绘制 取红景天苷对照品5.0 mg，精密称定，置于25 mL容量瓶中，加甲醇溶解制成含红景天苷约0．2 mg·L-1的对照品溶液，精密吸取0．6、1.2、1.8、2.4、3.0 mL，分别置于10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。 取各对照品溶液10μl 注入液相色谱仪中，记录色谱峰面积，红景天苷在12～60 mg·L-1内峰面积与对照品的质量浓度呈良好线性关系，其回归方程为A=1.2 850×104ρ+7.648×103，r= 0.999 8。 3.2 供试品溶液配制 供试品溶液的制备：称取约1.0 g红景天细粉(过5号筛，共8个样品，每个3份)，精密称定，体积分数为70％的乙醇8 mL回流提取，回流提取时间为3 h，放冷，取上清液0.8 mL置干燥洁净的10 mL 容量瓶中，以甲醇稀释并定容至刻度，微孔滤膜(0.45μm)过滤，取续滤液，即得。 3.3 含量测定 分别精密吸取供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，计算红景天苷含量。 ?三、气相色谱法 1、仪器和试剂 岛津RIA气相色谱仪、RPR-G1数据处理仪；硅醚化试剂为六甲基二硅胺烷-三甲基氯硅烷(2：1)。内标物：甘露醇丙酰化物(自制)。 2、色谱条件 OV-101-不锈钢毛细管柱(45 m×0.25mm)，程序升温200℃～245℃(5℃／min)，载气N2，柱前压196 kPa，流速55ml／min(分流比30：1)，尾吹30 mL／min，进样室温度285℃ 。FID量程10，衰减64。RPR-G1数据处理仪自动记录各峰面积。 3、试验方法 3.1线性范围 精密称取红景天苷40.0mg，分别吡啶定容于10mL容量瓶内，分别移取0.05，0.1，0.2，0.3，0.4 mL于同一小瓶中，真空挥干溶剂。0.1 mL吡啶溶