实验一 醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白课件.pptVIP

实验一 醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白 目的1、掌握电泳的基本原理 2、掌握电泳的基本操作 原理电泳:带电颗粒在电场中泳动的现象 　　各种蛋白质在同一pH条件下，因分子量和电荷数量等不同而在电场中的迁移率不同而得以分开。 不用支持物的 利用支持物 1）纸电泳 2) 淀粉凝胶电泳 3) 琼脂糖凝胶电泳 4）醋酸纤维薄膜电泳 5）聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE） 影响泳动速度的主要因素 1）电场强度：（越大，移动速度越快） 常压电泳：100-500V，2-10V/cm 高压电泳：500-10000V， 20-200V/cm 2）溶液的pH值：buffer。8.60 3）溶液的离子强度： （I越大，速度越慢；缓冲 效果越好） ，0.02-0.2之间。0.07 3）电渗现象：液体在电场中相对于固体支持物的相对移动。尽量避免有高电渗作用的支持物。 聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE） Davis 和Ornstein 1959年人血清蛋白 聚丙烯酰胺凝胶：由丙烯酰胺（Acr，单体）和N,N′-甲叉双丙烯酰胺（Bis，交联剂）共聚合而成（由过硫酸铵-四乙基乙二胺TEMED系统或核黄素-TEMED系统激发）。 分子筛，可通过调节单体浓度或与交联剂的比例来控制孔径大小，达到不同的分离目的。 凝胶可以是平板（垂直板型）或柱子（盘状） 作 用 使蛋白质成为亚基物质