实验二 微量凯氏定氮法测定总氮量课件.pptVIP

实验二 总氮量的测定―凯氏定氮法 一 目的： 学习凯氏定氮法测定蛋白质含量的原理 掌握蒸馏、滴定操作技术 二、原理 生物材料的含氮量测定在生物化学研究中具有一定的意义，蛋白质的含氮量约为16％，测出含氮量则可推知蛋白含量。 消化：有机物与浓硫酸供热，使有机氮全部转化为无机氮——硫酸铵。为加快反应，添加硫酸铜和硫酸钾的混合物；前者为催化剂，后者可提高硫酸沸点。 甘氨酸的消化过程可表示如下： CH2NH2COOH+3H2SO4 2CO2+3SO2十4H2O十NH3 2NH3+H2SO4 (NH4)2SO4 蒸馏：浓碱可使消化液中的硫酸铵分解，游离出氨，借水蒸汽将产生的氨蒸馏到一定量、一定浓度的硼酸溶液中，硼酸吸收氨后使溶液中的氢离子浓度降低， (NH4)2SO4+2NaOH 2NH3+2H2O+Na2SO4 2NH3+4H3BO3 (NH4)2B4O7+5H2O 滴定：用标准无机酸滴定，直至恢复溶液中原来的氢离子浓度为止，最后根据所用标准酸的摩尔数(相当于待测物中氨的摩尔数)计算出待测物中的总氮量。 (NH4)2B4O7+H2SO4+5H2O (NH4)2SO4+4H3BO3 本法适用于0.2 ~ 2.0 mg的氮量测定。 三、试剂 1、浓硫酸 2、粉末硫酸钾―硫酸铜混合物