16经典液相色谱法1概论.ppt

第十六章 经典液相色谱法 第一节 色谱法概述 一、色谱法的由来 1．1905年由俄国植物学家Tsweet创立植物色素分离见图示 2．现在：一种重要的分离、分析技术分离混合物各组分并加以分析固定相——除了固体，还可以是液体流动相——液体或气体色谱柱——各种材质和尺寸被分离组分——不再仅局限于有色物质 next 图示 固定相——CaCO3颗粒 流动相——石油醚 色带 back 二、色谱法定义、实质和目的 定义：利用物质的物理化学性质建立的分离、分析方法 实质：分离 目的：定性分析或定量分析 三、分类： 1．按两相分子的聚集状态分： 流动相固定相类型 液相色谱 液体固体液-固色谱 液体液体液-液色谱 气体固体气-固色谱 气体液体气-液色谱 气相色谱 续前 2．按固定相的固定方式分： 3．按分离机制分： 平面色谱 纸色谱 薄层色谱 高分子薄膜色谱 柱色谱 填充柱色谱 毛细管柱色谱分配色谱：利用分配系数的不同吸附色谱：利用物理吸附性能的差异离子交换色谱：利用离子交换原理空间排阻色谱：利用排阻作用力的不同 图示 色谱法简单分类 四、色谱法的特点 优点：“三高”、“一快”、“一广” 缺点： 高选择性——可将性质相似的组分分开 高效能——反复多次利用组分性质的差异产生很好分离效果 高灵敏度——10-11~10-13g，适于痕量分析 分析速度快——几~几十分钟完成分离一次 可以测多种样品 应用范围广——气体，液体、固体物质化学衍生化再色谱分离、分析对未知物分析的定性专属性差需要与其他分析方法联用(GC-MS,LC-MS) 第二节 色谱法的原理 一、色谱过程、分离原理及特点 二、分配系数与保留行为的关系 一、色谱过程、分离原理及特点 （一）色谱过程指被分离组分在两相中的“分配”平衡过程 以吸附色谱为例见图示吸附→ 解吸→再吸附 →再解吸 →反复多次洗脱→被测组分分配系数不同→ 差速迁移 → 分离 图示 理化性质的微小差异→吸附能力的微小差异 微小差异积累→较大差异→吸附能力弱的组分先流出；吸附能力强的组分后流出back 续前 （二）色谱分离原理色谱分离基于各组分在两相之间平衡分配的差异，平衡分配可以用分配系数和分配比来衡量 （三）色谱分离特点1．不同组分通过色谱柱时的迁移速度不等→提供了分离的可能性2．各组分沿柱子扩散分布→峰宽↑→不利于不同组分分离 二、分配系数与保留行为的关系 （一）基本术语 1．保留时间tR：从进样开始到某组分色谱峰顶（浓度极大点）的时间，即组分在色谱柱中的停留时间或组分流经色谱柱所需要的时间。2．死时间t0：分配系数为零的组分的保留时间，即组分在流动相中的停留时间或流动相流经色谱柱所需要的时间（又称流动相保留时间）。 续前 3．分配系数K（平衡常数）：指在一定温度和压力下，组分在色谱柱中达分配平衡后，在固定相与流动相中的浓度比（色谱过程的相平衡参数） 4.保留比R’：衡量溶质分子在色谱柱上相对移行速度 注：K为热力学常数与组分性质、固定相性质、流动相性质及温度有关实验条件固定，K仅与组分性质有关 （二）tR与K的关系： 续前 讨论：色谱条件一定时，tR主要取决K的大小 （色谱法基本的定性参数 ） K↑，tR↑ ，组分后出柱 K=0，组分不保留 K→∞ ，组分完全保留 结论：色谱分离前提→各组分分配系数不等 注：应选择合适分离条件使得难分离的组分K不等 2）色谱条件（s，m，T）一定时，K一定 → tR一定 1）组分一定，K不等的前提s和m改变T改变