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分子生物学检验技术教学大纲 第一章 原核生物基因组和病毒基因组 [目的要求] 掌握 基因的分子生物学定义;限制性片段长度多态性的概念；质粒的定义和用途；操纵子的结构 熟悉 病毒基因组和细菌基因组的特点。原核细胞内核酸含量、种类、功能和组织结构的差异; 了解 转座因子 大肠杆菌、HIV和HBV基因组特点 [教学时数] 3学时 [讲授内容] 基因的概念 基因的生物学定义、基因的分子生物学定义、细胞基因组。 原核生物和真核生物 生物种类、原核细胞和真核细胞内核酸含量、种 类、功能的差异，操纵子结构。 病毒基因组：重叠基因 HBV和HIV等病毒的结构特点 细菌基因纽 细菌染色体基因组的结构特点;大肠杆菌、质粒。 [复习思考题] 名词解释 基因、质粒、断裂基因、假基因、限制性片段长度多态性、操纵子 问答题 1·简述原核细胞基因组特点。 第二章 真核生物基因组 [目的要求] 掌握 真核生物基因组的特点;单拷贝序列、中度重复序列和高度重复序列的概念。 熟悉：染色质的结构和主要成分、核小体是染色质的基本结构单位。 了解 染色体形态、功能研究中所用术语与新技术简介、朊病毒。 [教学时数] 3学时 [讲授内容] 真核生物学特点 一般特点、C值矛盾、真核生物 DNA序列的类型(单拷贝序列、中度重复序列、高度重复序列、人多基因家族、DNA指纹技术(限制性片段长度多态性)。染色体的主要成分、染色体的分型、染色体疾病 [复习思考题] 名词解释 单顺反子、外显子、内含子、C值矛盾、单拷贝序列、中度重复序列、高度重复序列 问答题 真核生物基因组的特点。 第三章 癌基因和抑瘤基因 [目的要求] 掌握 癌基因和抑癌基因的概念；癌基因激活的机制 熟悉 sis家族、src家族、myc和myb家族、P53、RB家族及其表达产物；癌基因和抑癌基因的检测 了解 肿瘤发生的步骤；结肠癌的发病步骤 [教学时数] 3学时 [讲授内容] 肿瘤细胞的特征 肿瘤病毒和癌基因 DNA肿瘤病毒和癌基因;反转录病毒和癌基因。 肿瘤抑制基因 肿瘤抑制基因存在的证据;RB基因，p53基因。 肿瘤形成的多步骤学说 多步骤学说的实验证据;人类直肠癌和多步骤致癌论。 [复习思考题] 名词解释 癌基因、肿瘤抑制基因、反转录病毒 问答题 l 简述RB基因和p53的功能。 2.原癌基因的激活的机制 第四章 蛋白质组和蛋白质组学 [目的要求] 掌握 蛋白质组概念；二维电泳 熟悉 蛋白质组的研究范畴；研究蛋白质组的基本方法（如酵母双杂交、凝胶滞后电泳等） 了解 蛋白质的数据库；蛋白质的医学应用 [教学时数] 3学时 [讲授内容] 蛋白质组的概念和特点 蛋白质组的研究范畴 蛋白质和蛋白质的相互作用的研究方法（酵母双杂交、噬菌体展示、生物传感芯片质谱、蛋白质定点诱变） 蛋白质和核酸相互作用的研究方法（凝胶滞后试验、滤膜结合法、甲基化干扰实验、DnaseI足纹分析等） 蛋白质质点的分离和鉴定（二维电泳、质谱技术等） 蛋白质的结构分析 蛋白质的数据库 [复习思考题] 概念 蛋白质组、凝胶滞后实验 简答题 蛋白质和核酸相互作用的研究方法有哪些？ 二维电泳的基本原理是什么？ 酵母双杂交系统的原理 第五章 核酸的分离和纯化 [目的要求] 掌握 基因组DNA的分离方法和原理；质粒DNA分离方法和原理；核酸的浓度和纯度鉴定 熟悉 核酸分离的基本原则；RNA抽提；mRNA的分离和纯化 了解 CsCl-EB法的原理 核酸的回收和保存 [教学时数] 3学时 [讲授内容] 核酸抽提的原则 核酸的分离、纯化、浓缩、洗涤 核酸的保存、浓度和纯度鉴定（紫外分光光度法、荧光光度法） 基因组DNA分离的原理，各试剂的主要用途 DNA的回收（DEAE纤维素膜插片电泳法；电泳洗脱法；低熔点琼脂糖凝胶回收法） 质粒DNA的提取和纯化（碱裂解法、煮沸法） 质粒DNA的纯化和回收 RNA的抽提和mRNA的分离 [复习思考题] 问答题 酚-氯仿法抽提基因组DNA的原理 质粒制备的主要方法是什么？并阐明其基本原理 如何鉴定核酸的浓度和纯度 第六章 DNA重组概述 [目的要求] 掌握 基因重组的主要工具酶和它们的作用；DNA重组的主要载体和它们各自的优点 熟悉 克隆和DNA重组的概念、基因重组的基本步骤 了解 基因重组的发展历史；重组DNA技术意义 [教学时敷] 3学时 [讲授内容] 分子