液相色谱(应化2013)案例.ppt

t/min 硅胶-烷基键合相中烷基链长对反相色谱分离的影响 1-尿嘧啶；2-苯酚；3-乙酰苯；4-硝基苯；5-苯甲酸甲酯；6-甲苯 反相键合色谱中，键合相碳链越长极性越小，分离效果越好 C1 C8 C18 4 应用 液液色谱是基于化合物中取代基的数目或性质不同，或化合物的相对分子量不同达到分离的。能分析各种不同性质的样品，无论是极性的和非极性的，水溶性和油溶性的，离子型的和非离子型的化合物 三 离子交换色谱 1 原理 利用离子交换树脂上可电离的离子与试样中待分离的离子进行可逆交换，根据这些离子对交换剂具有不同的亲和力进行分离 2．固定相 （1）薄膜型离子交换树脂：在载体表面涂渍约1％的离子交换树脂 （2）离子交换键合固定相：用化学反应将离子交换基团键合在惰性载体表面 其中强酸性和强碱性交换树脂比较稳定，pH适用范围宽，因此应用较多 3 流动相 离子交换色谱流动相为盐类缓冲溶液，通过改变pH、缓冲剂类型和离子强度等条件来控制分配比k，改变交换剂的选择性，进而影响样品待测物的分离 pH值：影响酸或碱的离解平衡，控制组分离子形式所占的分数。当组分以分子形式存在时，则不被保留；离子分数越高，保留值越大。常用的有柠檬酸盐、磷酸盐、甲酸盐、乙酸盐和氨水等 离子强度I：组分保留值受流动相中盐类总浓度控制。增加外加阴阳离子将降低样品离子的竞争吸附能力，使组分保留值减小。不同种类的盐对交换剂的亲和能力不同，从而可影响柱的选择性 阴离子的滞留次序: 阳离子的滞留次序: 4 应用 适用无机离子混合物的分离，亦可用于有机物的分离，例如氨基酸、核酸、蛋白质等生物大分子。因此，应用范围较广 离子交换色谱的局限：某些无机离子无紫外吸收，不能采用紫外检测器进行分析 四 离子色谱 1 原理：与离子交换色谱原理一样，只是采用电导检测器检测，但由于流动相都是强电解质，其电导率比待测离子约高2个数量级，这种强背景电导会完全掩盖待测离子信号 1975年Small提出，在离子交换柱之后，再串结一根抑制柱。该柱装填与分离柱电荷完全相反的离子交换树脂。通过分离柱后的样品再经过抑制柱，使具有高背景电导的流动相转变为低背景电导的流动相，从而可用电导检测器检测各种离子的含量 例如：分析阳离子时，以无机酸为流动相，抑制柱为高容量的强碱性阴离子交换树脂，则发生下列反应： R+—OH + HCl(流动相)——R+—Cl- + H2O R+—OH + MCl(待测物)——R+—Cl- + M+OH- 由反应可见：经抑制柱后，一方面将大量酸转变为电导很小的水，消除了流动相本底电导的影响。同时，又将样品阳离子M+转变成相应的碱，由于OH-离子的淌度为Cl-离子的2.6倍，提高了所测阳离子电导的检测灵敏度。对于阴离子样品也有相似的作用机理 该法的不足之处：抑制柱要定期再生、谱峰在经过抑制柱后会展宽，降低分离度 因此有人提出了使用电导率很低的溶液(如苯甲酸盐稀溶液)作流动相称为非抑制型离子色谱或单柱离子色谱 2 离子色谱的固定相：离子交换树脂 3 离子色谱的流动相：盐类缓冲溶液 4 离子色谱的应用：离子或可离解的化合物，不仅可应用于无机离子的分离，也可用于有机离子和糖类、氨基酸等生物大离子 五 离子对色谱 原 理:将一种（或数种）与溶质离子电荷相反的离子（称对离子或反离子）加到流动相或固定相中，使其与溶质离子结合形成疏水性离子对，从而控制溶质离子保留行为的一种色谱法 固定相：加入对离子的分配或吸附色谱固定相 流动相：加入对离子的分配或吸附色谱流动相 阳离子/有机碱分析:烷基磺酸钠，如己烷磺酸钠作为对离子 阴离子/有机酸分析:季胺盐，如氢氧化四丁基铵或氢氧化十六烷基三甲铵作为对离子 反相离子对色谱：通常采用非极性的固定相如十八烷基键合相，用含有对离子的甲醇－水（或乙腈－水）作为流动相 应用：强极性的有机酸和有机碱 六 尺寸排阻色谱法 1 原理：利用被测组分分子大小不同、在固定相上选择性渗透（有机相），过滤（水相）实现分离 2 排阻色谱固定相：凝胶 （1）软质凝胶，如葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶，适用于水作流动相，机械强度较小，只能在常压下使用 （2）半硬质凝胶，如交联聚苯乙烯,是应用最多的有机凝胶，比软质凝胶稍耐压，是亲油性的，宜用有机溶剂作流动相，能耐较高压力，流速不宜大 （3）硬质凝胶，如多孔硅胶、多孔玻璃，其特点是化学稳定性、热稳定性、机械强度都较好，可在柱中直接更换溶剂，在较高压力和较高流速下操作，缺点是有吸附活性，需要进行特殊处理 3 排阻色谱流动相 必须能溶解样品，并必须与凝胶本身非常相似，这样才能润湿凝胶。当采用软性凝胶时，溶剂也必须能溶胀凝胶，常用