第3章_微生物细胞的破碎技术.ppt

* * * 机械破碎法与非机械法比较 3.3 破碎方法的选择 细胞的数量 破碎条件——目标产物对破碎条件的敏感性 破碎目标——待破碎细胞的机械强度 3.3.1破碎方法选择原则 (1) 目标生化物质的位置： (2) 目标生化物质对破碎条件的敏感性： (3) 破碎程度、目的 (4) 规模、经济 3.4破碎率的测定 1.直接测定法－平板计数 2.间接法－测定释放的蛋白质量或酶的活力或相对电导率 4. 基因工程表达产物的后处理 ——包含体的分离与复性 4.1什么是包含体 外源蛋白质基因在受体菌中表达时形成的不溶的没有活性的蛋白质聚集体称为包含体。（包含体内除目标蛋白外还有微量的质粒，rRNA和RNA聚合酶。） 4.2包含体形成的原因 蛋白质的多肽链折叠成立体结构的过程中受周围环境的影响，分子间的相互作用影响到分子内的折叠。 a.由于表达的外源蛋白缺少某些折叠的协助因子或局部微环境不适宜，不能正确的形成次级键。 b.表达率过高，合成速度太快，无足够的时间折叠，二硫键不能正确配对，过多的蛋白质间非特异性结合，导致溶解度降低。 c.重组蛋白氨基酸组成－硫氨基酸越多越易形成包含体。 d.重组蛋白质是E.coli异源蛋白，大量生成后，缺乏修饰所需要的酶和辅助因子，致使中间体大量累积，异形成包含体。 E.蛋白质的自身溶解性