第七章非水相酶催化反应.ppt

第七章 非水相酶催化反应 非常规介质 有机介质 气态反应介质 超临界流体 离子液体 有机相酶反应的优点 ⒈ 有利于疏水性底物的反应 ⒉ 使酶促水解反应逆向进行（利用蛋白酶在非水介质中催化合成肽） 3. 适合于转酯反应（水中因水解副反应而导致产物收率低） 4. 反应产物在水中不稳定（酚的酶促氧化产物醌） ⒌ 可避免微生物污染 ⒍ 可提高酶的热稳定性，提高反应温度加速反应 7.1 典型生物催化介质系统 单一的水或缓冲溶液系统 均相水-有机溶剂系统 水-有机溶剂两相系统 反胶束系统 7.1 典型生物催化介质系统 5. 微水有机溶剂均相系统 6. 超临界流体系统 7. 离子液体介质系统 8. 无溶剂或寡溶剂系统 7.2 非水溶剂的影响及选择 对酶选择性的影响 底物专一性发生变化 对映体选择性发生改变 枯草杆菌蛋白酶在有机溶剂中催化D型N-乙酰氨基酸转酯反应 2 对酶稳定性影响 热稳定性提高—增加构象的刚性 3 选择合适的溶剂 水溶性有机溶剂：甲醇、乙醇、丙醇、正丁醇、甘油、丙酮、乙腈等 水不溶性的有：石油醚、己烷、庚烷、苯、甲苯、四氯化碳、氯仿、乙醚、戊醚等 溶剂极性：Lg P 正辛醇/水 （1）与反应相容 （2）对主要反应呈惰性 （3）综合考虑密度、粘度、表面张力、毒性、废物的处理和成本等 7.3 水的影响 保证必需水含量 水是保证酶催化反应的必需条件，活性构象是水分子直接或间接由氢键等非共价键相互作用来维持 必需水：是维系酶构象稳定和酶催化活性所必需的最少量的水分子。只要必需水不丢失, 其他的大部分水可以由有机溶剂代替 影响酶必需水含量的因素 1) 不同酶需水量不同 一般因酶分子本身, 或溶剂系统不同而有所不同。 2) 同一种酶在不同有机溶剂中需水量不同。溶剂疏水性越强，需水量越少。 7.4 选择合适的酶及酶形式 酶种类的选择： 应具有对抗有机介质变性的潜在能力，在有机介质中能保持其催化活性构象。 酶是否适于在有机介质中反应，除与酶性质有关外，还取决于酶-底物、产物-溶剂间的关系问题。这完全需要用实验来决定。 酶形式的选择 ⑴ 酶粉：将酶做成冻干粉，在有机介质中充分搅拌，超声波处理，使得颗粒变小，悬浮于介质中 ⑵ 化学修饰酶：酶经过修饰变得稳定，有利于酶在有机溶剂中的稳定性 ⑶ 固定化酶：酶吸附在固相载体上（如硅胶、硅藻土、玻璃珠等）制成固定化酶，其对抗有机介质变性的能力、反应速度、热稳定性等都可提高 7.5 有机介质中酶催化的应用 酶 催化反应 应用 蛋白酶 肽合成 合成多肽 酰基化 糖类酰基化 羟基化酶 氧化 甾体转化 过氧化物酶 聚合 酚类、胺类化合物的聚合 胆固醇氧化酶 氧化 胆固醇测定 醇脱氢酶 酯化 有机硅醇的酯化 有机介质中酶催化的应用 酶 催化反应 应用 脂肪酶 肽合成 青霉素G前体肽合成 酯合成 醇与有机酸合成酯类 转酯 各类酯类生产 聚合 二酯的选择性聚合 酰基化 甘醇的酰基化 有机介质中酶催化的应用 手性药物的拆分 手性高分子聚合物的制备 酚树脂的合成 导电有机聚合物的合成 发光有机聚合物的合成 有机介质中酶催化的应用 食品添加剂的生产 多肽的合成 甾体转化 生物能源 手性药物的拆分 手性化合物：是指化学组成相同，而其立体结构互为对映体的两种异构体化合物 手性药物两种对映体的药效差异 一种有显著疗效，另一种有疗效弱或无效 一种有显著疗效，另一种有毒副作用 两种对映体的药效相反 两种对映体具有各自不同的药效 两种消旋体的作用具有互补性 手性药物的拆分方法 非生物法、生物法 非生物法（机械分离法、 形成和分离对映体异构法、 色谱分离法、 动力学拆分） 生物拆分法 快：E+A→E+P 慢：E+B→E+Q 对映体选择率：底物中一对异构体（同一个酶的两种竞争性底物）的Vm/Km之比为酶的选择性。 生物拆分法 拆分实例 * * 底物和产物 酶 Zaks A, et al. J Am Chem Soc, 1986, 108(10): 2767-2768. Margolin et al. J Am Chem Soc, 1987, 109(25): 7885-7887. 100 ?C 加热 青霉素酰化酶及其催化作用 利用其底物专一性及对映体的选择性进行光学异构体的合成与拆分。 青霉素酰化酶催化叔亮氨酸拆分