第四章 酶工程.pptVIP

第四章 酶工程 一、概述 问题：1、什么是酶？酶作为催化剂有何特点？ 2、什么是酶工程？发展历程如何？ 3、酶工程研究的内容是什么？ (一)酶 ：是具有催化活性的生物物质。 作为催化剂，酶具有催化剂的共性： 1）、只需要很少量就可以催化大量物质反应，在反应前后其质量不变； 2）、它只能加速可逆反应达到平衡的时间，而不能改变反应的平衡点； 3）、只能催化热力学允许发生的反应。 1）、催化效率高； 2）、专一性强； 3）、反应条件温和； 4）、活力可被调控； 5）、对环境条件比较敏感。 酶工程的技术内容： 1）、各类自然酶的开发和生产； 2）、酶的分离、纯化及鉴定技术； 3）、固定化技术； 4）、多酶 反应器的研制和应用； 5）、与其它生物工程技术领域的交叉和渗透； 6）、酶分子的改造与修饰； 7）、酶的模仿技术； 8）、酶 的动力学研究。 其中，固定化技术是酶工程的核心技术。为什么这么说呢？ 因为只有固定化技术的发展和应用，酶在工业生产中的应用价值才得以真正体现。 二、酶的开发与生产 一、产酶微生物的分离和选育 1.优良产酶菌种应具备的条件 （1）酶产量高 （2）易培养（生长速率高、营养要求低） （3）遗传性能稳定，不易退化 （4）易分离提纯 （5）安全可靠（不是致病菌） 3、产酶微生物优良菌种的选育： 1）、从自然界分离筛选； 2）、人工诱变育种； 3）、遗传工程育种。 植物、动物、微生物细胞的特性比较 三、固定化技术 （一）、概述： 问题：什么是固定化技术？它产生的背景和发展历史如何？ 固定化生物技术——通过化学或物理的手段将酶或游离细胞定位于限定的空间区域内，使其保持活性并可反复利用。 1）、发现于1916年； 2）、诞生于60年代； 3）、成熟于70年代； 4）、实用化并大规模应用于80年代。 （二）、酶的固定化方法 自60年代以来，科学家对酶和细胞的固定化技术进行了大量的研究，迄今为止，具体的固定化方法多达一百种以上。根据所用载体及操作方法的差别可分为三类： 优点：条件温和，操作简便，酶活力损失少。 缺点：结合力弱，易解吸附。 （三）、细胞的固定化技术 1、定义：将细胞限制或定位于特定的空间位置的方法 。 被限制或定位于特定空间位置的细胞称为固定化细胞。 （四）、固定化方法和载体的选择 1、固定化方法 的选择：一般而言，对酶的固定化多采用共价结合、离子结合和物理吸附法等，有时还可跟交联法配合使用；而固定化细胞则以包埋法为主。 考虑因素： 1）、安全性； 2）、固定化酶操作的稳定性； 3）、成本。 2、载体 选择的条件： 1）、固定化过程不引起酶的变性； 2）、对酸碱度有一定的耐受力； 3）、有一定的机械强度； 4）、有一定亲水性及良好的稳定性； 5）、有一定疏松网状结构，颗粒均匀； 6）、共价结合时具有可活化基团； 7）、有耐受酶及微生物的能力； 8）、廉价易得。 （五）、固定化生物催化剂的性质和特点 1、固定化酶的性质和特点： A、酶活力的变化：通常低于天然酶（有例外）。 原因可能是： 一是活性部位的重要氨基酸侧链基团与载体相结合； 二是酶的空间结构发生变化； 三是酶与底物结合时产生空间位阻效应； 四是包埋法固定化酶还有底物和产物扩散阻力的增大。 2）、酶稳定性变化： 在酶转化反应中，天然酶对温度、有机溶剂、极端PH值及金属离子等十分敏感，稳定性差； 固定化酶的耐热性、对变性剂、抑制剂、蛋白酶的抵抗力增加。 一是稳定性比天然酶高，使用半衰期比较长； 二是反应后酶与底物容易分开，并可长期反复使用； 三是反应液中没有残留酶，因此易于纯化，产品质量高； 四是具有一定的机械强度，成型后装入酶反应器，可实现连续倾向自动化控制，并使设备小型化，节省能量； 五是酶的利用率高，产品成本低； 六是转化过程基本无三废排出。因此称为（无公害酶）。 2、固定化细胞的性质和特点 与固定化酶相比，固定化细胞的情况比较复杂。 （1）有活性升高的现象。 （2）稳定性的增加 。 （3）最适温度和最适pH常保持不变。 细胞固定化后，其优点主要表现在： 1）、无须进行酶的分离纯化，节省起始投资； 2）、细胞保持原始的生命活动状态，酶在细胞内环境中稳定性较高，进行完整的细胞固定化时，酶活力损失少； 3）、可利用细胞内辅助因子再生系统和酶系统，催化一系列反应； 4）、细胞生长停滞期短，细胞密度大、反应快、抗污染能力强； 5）、可以连续使用，大大节约生长细胞耗用的养料； 6）、应用固定化细胞生物反应器进行连续反应，可避免反馈抑制和产物的分解； 7）、固定化细胞的稳定性大都比游离细胞高。 3、固定化酶（细胞）的评价指标： 相对酶活