蛋白质变性与沉淀时.ppt

二、实验原理 维持蛋白质胶体溶液稳定因素： 1.水化膜 2.颗粒表面电荷 去除上述稳定因素可使蛋白质沉淀析出。 实验现象分析 试管1中蛋白液在氢氧化钠调节下，其pHpI，蛋白质分子带负电荷，加入ZnSO4 ，Zn2+与带有负电荷的蛋白质分子结合生成不溶于水的盐沉淀。 试管2中蛋白液加有三氯醋酸，其pHpI，蛋白质分子带正电荷，三氯醋酸根与带有正电荷的蛋白质分子结合成不溶于水的盐沉淀。 试管3中只加有蛋白液和ZnSO4，蛋白质分子因不带电荷或带较少的正、负电荷，与Zn2+不反应。 实验现象分析 试管1中加入无水乙醇，无水乙醇破坏蛋白质分子表面的水化膜，使蛋白质沉淀。 试管2中加入无水乙醇，无水乙醇破坏蛋白质分子表面的水化膜，使蛋白质沉淀。又加入少量的氯化钠中性盐，使蛋白质分子表面的电荷减少，沉淀更充分。 * * 实验项目 蛋白质变性与沉淀 2学时 一、实验目的 1.掌握蛋白质变性与沉淀两者 的关系； 2.熟悉刻度吸量管的正确使用；  3.了解蛋白质变性与沉淀的原 理及各种沉淀方法。 （一）蛋白质变性 蛋白质受某些物理或化学因素的影响，空间结构发生改变，生物活性丧失。称为蛋白质变性。 （二）蛋白质沉淀： 使蛋白质从溶液中析出的现象。 1、盐析 2、重金属盐沉淀 3、有机酸试剂沉淀法 4、有机溶剂沉淀法 三、实验仪器与试剂 1.仪器 试管、刻度吸量管、洗耳球等。 2. 试剂 5％蛋白质溶液、 2.5％蛋白质溶液、 10％ZnSO4溶液、 0.1mol/LNaOH、 1％三氯醋酸、无水乙醇、NaCl（固体） 四、实验内容及操作步骤 1.重金属盐及某些酸类沉淀蛋白质 2.乙醇沉淀蛋白质 （一）实验内容 1.重金属盐及某些酸类沉淀蛋白质 1）实验原理 C O O - N H 3 + P O H - H + 重 金 属 离 子 M + 酸 根 X - C O O - N H 2 P C O O H N H 3 + P C O O - M + N H 2 P C O O H N H 3 + X - P （二）操作步骤及原理 2）操作步骤 现象 — 20滴 — 1% 三氯醋酸 20滴 — 20滴 10% ZnSO4 — — 2滴 0.1mol/L NaOH 2滴 2滴 2滴 5% 蛋白质溶液 试管3 试管2 试管1 试剂（滴） 3）观察、记录实验现象，并解释之。 结果记录 澄清 沉淀 沉淀 现象 — 20滴 — 1% 三氯醋酸 20滴 — 20滴 10% ZnSO4 — — 2滴 0.1mol/L NaOH 2滴 2滴 2滴 5% 蛋白质溶液 试管3 试管2 试管1 试剂（滴） 2.乙醇沉淀蛋白质 1）实验原理 乙醇溶解于水，破坏蛋白质 分子的水化膜，加入少量中性盐 抑制蛋白质的解离，使电荷减少，沉淀更完全。 2）操作步骤 现象 1mL 1mL 无水乙醇 数粒（适量） — 结晶NaCl 0.5 mL 0.5 mL 2.5%蛋白质溶液 试管2 试管1 试剂（mL） 3）观察、记录实验现象，并解释之。 结果记录 沉淀充分 沉淀 现象 1mL 1mL 无水乙醇 数粒（适量） — 结晶NaCl 0.5 mL 0.5 mL 2.5%蛋白质溶液 试管2 试管1 试剂 五、注意事项 1.试剂滴管不能交叉使用，防污染试剂 2.刻度吸量管不能交叉使用，否则污染 试剂，影响反应现象。 3.做完实验把试管和试管架洗干净， 桌面擦干净，登记签名。 4.值日生听老师安排，认真打扫，经老 师批准才能离开实验室。