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细胞生物学实验 实验一　线粒体和液泡系的超活染色与观察 活体染色：是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。活体染色能显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动。 活体染色的目的：是研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。 活体染色的分类：根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类。 体内活染：是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。 体外活染（超活染色）：是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。 活体染色的基本原理：活体染料与被染的细胞或组织之间能发生“电化学”吸引作用。碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们彼此之间就发生了“电化学”吸引作用。 实验目的 　　观察动、植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布。学习一些细胞器的超活染色技术。 实验原理 线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和数量随不同物种、不同组织器官和不同的生理状态而发生变化。 詹纳斯绿B是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态），呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）。 中性红为弱碱性染料，对液泡系（即高尔基体）的染色有专一性，只将活细胞中的液泡系染成红色，细胞核与细胞质完全不着色，这可能是与液泡中某些蛋白质有关。 实验用品 ⒈器材：显微镜、恒温箱、镊子、双面刀片、载玻片、盖玻片、表面皿、吸管、牙签、吸水纸。 ⒉试剂： Ringer溶液、1／3000中性红溶液、1／5000詹纳斯绿B溶液 ⒊材料：人口腔上皮细胞、洋葱鳞茎内表皮细胞、绿豆幼根根尖 实验方法 ⒈线粒体的超活染色与观察 ⑴人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色观察 刮取口腔颊粘膜上皮细胞，置于1／5000詹纳斯绿B染液中， 37℃染色10～15min，显微镜下观察。 注意不可使染液干燥。 ⑵洋葱鳞茎表皮细胞线粒体的超活染色观察 撕取一小片洋葱鳞茎内表皮，置于1／5000詹纳斯绿B染液中，染色10～15min，镜下观察。 ⒉液泡系的超活染色与观察 取绿豆根尖（约1～2cm长）用双面刀片将根尖纵切，放入1／3000中性红染液中，染色5～10min，制片观察。 由低倍镜到高倍镜观察，注意由分生区到成熟区液泡的演进过程。 实验注意事项： 1.实验用的载玻片和盖玻片要清洗干净。 2.实验操作要快速，以保证材料的生理活性。 3.染色过程中注意不可使染色液干燥。 作业： ⒈绘制口腔上皮细胞示线粒体形态与分布。 ⒉绘制显微镜下的根尖分生区、伸长区和成熟区的典型细胞各一个，用以说明植物细胞液泡系的演进过程。 * * *