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上海交通大学研究生课程作业课程名称 细胞生物学 课程代码 F150605130915000M01 专 业 畜牧学 姓 名 甄林青 学 号 1131509046 班 级 细胞生物学研究热点问题1 囊泡运输1.1囊泡及其形成真核细胞与原核细胞的最主要区别就是真核细胞具有异常复杂的内部组织结构。在真核细胞中， 各种细胞功能由膜包裹的细胞核及各种细胞器完成。生物膜构成了细胞及细胞器之间的天然屏障，使得一些重要的生命活动能在相对独立的空间内进行，由此产生了细胞之间、细胞器之间的物质、能量和信息交换的过程。细胞内的膜性细胞器之间的物质运输(如蛋白质、脂类)，主要是通过囊泡完成的。囊泡是由单层膜所包裹的膜性结构，从几十纳米到数百纳米不等，主要司职细胞内不同膜性细胞器之间的物质运输，称之为囊泡运输。囊泡的形成也成为出芽过程（图1），是特异性蛋白选择性聚集在一起，由质膜包被形成突起，进而形成运输小泡。鲁斯曼用新创建的无细胞体系鉴定出囊泡形成过程所需的三大类基本元件a、内质网或高尔基体膜，这是囊泡形成的基础。b、形成囊泡被膜所需的相关分子，保证了囊泡突起的形成和分离。c、一种GTP结合蛋白，在GTP结合的前提下启动囊泡的形成。 细胞内的囊泡有很多种，按结构特征，可以分为包被囊泡和无包被囊泡两类；按生理功能，可分为转运囊泡、储存囊泡、分泌囊泡等。有被囊泡主要有三种：网格蛋白有被小泡、COPⅡ、COPⅠ。网格蛋白有被小泡主要介导质膜到内体、高尔基体到内体、高尔基体到溶酶体的物质运输。COPⅡ介导从内质网到高尔基体的物质运输。COPⅠ主要负责捕捉、回收、转运内质网逃逸蛋白，是从高尔基体到内质网的逆向运输。1.2囊泡运输方式囊泡运输有胞吞作用和胞吐作用两种，其中胞吞作用主要包括吞噬（如固体颗粒或分子复合物）、胞饮作用（细胞外液滴）、受体介导的内吞（如专一性蛋白等大分子）作用。胞吐作用有结构性分泌途径和调节性分泌途径两种。囊泡运输既是生命活动的基本过程，又是一个极其复杂的动态过程，在高等真核生物中尤其如此，涉及到许多种类的蛋白质和调控因子。囊泡运输一般包括出芽、锚定和融合等过程（图2），需要货物分子、运输复合体、动力蛋白和微管等的参与以及多种分子的调节。囊泡的定向运输和融合机制是囊泡运输的关键。囊泡与靶膜的融合是一个涉及多种蛋白锚定结合、装配与去装配的复杂调控过程，具有高度的特异性。1.3囊泡融合相关基因Randy W．Schekman 利用酵母通过遗传学筛选鉴定出调节细胞内物质运输的基因， 这些基因可以被分为三大类， 这些基因的突变导致了内质网、 高尔基体或细胞表面( 只在 sec1 突变的特定情况) 运输物质的聚集。其中对 sec17 和sec18 的突变体研究揭示了其在囊泡融合过程中的关键作用。Schekman 通过对关键基因的研究提供了囊泡运输和融合的遗传学研究基础， 系统性地揭示了囊泡运输及其与靶区域膜结构相互作用的过程( 图3)。1.4囊泡融合关键蛋白James E. Rothman利用离体重组技术研究囊泡的出芽和融合， 并纯化出囊泡运输的关键蛋白。第1个被纯化出来的蛋白是N-己基顺丁烯二酰亚胺敏感因子( N-ethylmaleimide- sensitive factor, NSF) 。之后纯化出关键蛋白可溶性 NSF 附着蛋白( soluble NSF- attachment protein, SNAP)，SNAP 与膜结合，帮助招募NSF。在神经组织中发现的关键蛋白命名为可溶性 NSF附着蛋白受体( soluble NSF- attachment protein receptors, SNAREs)。根据3个SNAP蛋白在细胞中的定位，以及其间存在的化学量的关系，Rothman提出了SNARE 假说——目的区域和囊泡中的 SNARE 蛋白( t- SNARE 和v- SNARE)通过影响一系列步骤包括突触锚定( docking)、激活( activation) 和融合( fusion) ，在囊泡融合中发挥关键作用（图4）。1.5调节膜融合时间的机制Thomas C. Südhof通过研究神经递质的释放发现突触快速胞吐作用受细胞内Ca2+浓度的严格调控，complexin和 synaptotagmin 是钙离子介导的囊泡融合的关键蛋白。complexin 在突触融合的晚期发挥作用， 它阻碍了组成型融合， 使调节型胞吐发生，synaptotagmin1做为钙离子受体与钙结合促进神经递质释放。Südhof 为囊泡融合的时间调控研究带来了重要发现， 他揭示了突触中钙离子水平调控神经递质释放的途径。囊泡运输的研究，一方面加深了人们对蛋白质翻译后详细功能发挥途径的理解，对一些生命现象有了新的认识，相关研究已