MAPS基因整合位点高通量测序分析的新方法.docVIP

浙江大学 硕士学位论文 MAPS：基因整合位点高通量测序分析的新方法 姓名：丁东 申请学位级别：硕士 专业：生物化学与分子生物学 指导教师：林标扬 201109  ????  ? ??? ????? ?? ?????琤? ??? ??????????．? ????，????? ????? ????? ???????? ? ????—?????瑆?????? ? ??? ?? ?? ? ? ? ???? ????? ??? ? ?? ? ????? ?? ??? ????? ? ? ? ????? ??????? ?? ???????? ?? ??????????? ? ???·???? ??? ?? ???? ??? ? ?????? ?? ?????????????????? ??? ? ?? ?????????琲? ??? ? ?????? ?? ? ? ? ??? ??? ? ?? ??? ???????????????? ??????? ??? ??? ?????? ??????????? ?????? ??? ?? ? ? ????? ?????? ???????????????? ??????????? ?? ???????????，??????? ??  ? ????? ? ?? ????．?? ??????? ??? ????? ??? ??．  谢  特别感谢我的女友王璐，在实验挫折时振奋人心的交谈让我最终完成了这一论 文。 杭州·华家池畔  ??中的过程，主要包括转座子??????、逆转录病毒 过程中的整合行为。基因整合组?????是一个从全基因组水平分析整合事件 ????? 合、转座子整合和基因治疗载体整合。 构，基因组构成和复制等方面具有很强的相似性?】。逆转录病毒的遗传物质由两条 ??????? ????通过二硫键?????????嗔?Ｍ?．?所示为逆转 录病毒颗粒的截面示意图。  及??嗦氲牡鞍撞?锉阕R频较赴????????内【?俊Ｋ婧螅?《镜腞? 被病毒自带的逆转录酶反转录成双链??????????琩????】。病毒 ??肿拥某つ┒酥馗葱蛄??????? 的启动??俊Ｄ孀B贾?螅???腄?整合到宿主细胞的基因组内，整合的病毒 图?? 核孔进入细胞核内【???。整合的过程，首先由整合酶识别病毒的?黜序列，此时 整合酶将细胞的??卸希???恼承阅┒擞氩《镜腄?连接????。即使两者 的粘性末端不互补，也能完成连接。整合完成之后，位于??说腖?帮助病毒借用 宿主细胞的转录机制。一些比较复杂的逆转录病毒，比如人免疫缺陷病毒??? ???????????琀???嗦攵钔獾姆词降骺匾蜃???．?????????， ??????虼四芄挥跋霷?的转录类型和数量。 或顺式调控序列??．?????  型肝炎病毒????? ， ， ??? ? 、。“”：??Ⅲ∽?一 ～、～～～。——十 图?? 模板转录??，后者转移到胞浆内，⑦病毒的??由细胞系统翻译成蛋白，⑧病毒包装， 基于转座子的基因整合是指通过转座子在基因组上的活跃转座而形成的基因整  第一章基因整合组分析的研究进展?凼? ?≤了胡? 转魔受体位点 眦，非同潭性末端接合 网『———翟蕊馘’溺∥ 垒塑照???＃?！＃?浴?＃?＃?堇胕熊猁卜 图?? ??W?拥淖W???改编自【?? 连接。整合处的??笨谟蒁?聚合酶????????虳?连接酶??  ? ? ? ? ? ? 甤 ? ? ? ? ? ！ 鰇 ? ? ? ? ? ? ?頛? ? ? ? ? ? ? 铩 ！ ? ? ? ? ? ? ? ? ??頤??? 图?? ???蚣浣犹迥?? 基因治疗???????侵附?逋?? ????和非整合病毒载体 病毒导入法【?】、整合病毒载体??????  基因整合组分析的研究进展?凼? ???—????????珹????偷ゴ筐逭畈《???? 等。 图?? 重组病毒颗粒的制备和靶细胞感染过程示意图 培养基，浓缩病毒颗粒，⑦病毒颗粒转导治疗基因到靶细胞，∞?《窘?胂赴??⑹头臨?  ??基因整合分析的应用 整合位点分析之所以作为一种遗传学研究工具，是由于基因整合引起的基因突 变即整合突变过程????????????，能够直接或间接的产生新的表型 ?? 致病过程主要通过编码的病毒蛋白实现。相反，整合突变是禽源和鼠源逆转录病毒 ???琈??，能够不断地整合相同的细胞，使宿主?∈?积累足够的突变而最  第一章 基因整合组分析的研究进展?凼? 因蛋白。以??《疚@??环矫妫?矶嘌芯勘ǖ繦?不完全整合形成的非完整 ??鞍自銮苛怂拗飨赴?亩窕?蹦躘???，提示基因组的整