Thanatin-PPA融合蛋白的表达和特性研究.docVIP

浙江理工大学 硕士学位论文 Thanatin--PPA融合蛋白的表达和特性研究 姓名：刘学锋 申请学位级别：硕士 专业：生物化学与分子生物学 指导教师：徐涛；吕正兵  浙江理工大学硕士学位论文 ?????????? 单子叶植物凝集素家族。研究表明，掌叶半夏凝集素具有植物保护、抗肿瘤等功 白。死亡素?????是在昆虫斑腹刺益蝽???????????中发现，由 凝集素的基因?模煌ü?氐?分别将编码柔性肽基因和死亡素基因融合到 本文将融合基因连接到???表达载体上，转化到??感受态细胞中， 体经洗涤、稀释复性和纯化，用于后续实验。 本文构建酵母表达载体??????，重组质粒经酶切鉴定和测序分析显示  浙江理工大学硕士学位论文 本文进行了原核表达蛋白的凝血活性、抗菌活性和体外抗肿瘤活性的分析。 融合蛋白在表达过程中抑制宿主细菌的生长；以半夏新鲜蛋白为对照的凝血活性  浙江理工大学硕士学位论文 ???? ??? ? ??????????甌? ?? ??? ?? ? ?? ? ? ??? ??????? ?? ? ???? ???琖?????? ??? ???? ??? ????? ???? ?? ? ??? ????? ???琣????? ? ?? ??? ?????甌? ? ?? ????????瓸?? ? ?????? ? ??? ?????? ??? ????? ? ? ????? ? ?? ???? ????? ????． ? ??琖????? ? ????? ? ?????????? ????? ??? ?? ? ??????．???????? ??? ? ??? ??? ?? ???????? ?? ??????．?? ????? ?????????． ?????? ?  浙江理工大学硕士学位论文 ??? ??? ?? ??? ??? ?? ????． ????? ??? ????? ??? ?? ????????? ??? ???????畃??．?? ? ?? ? ???? ? ? ???甌? ??? ????? ??? ? ? ? ? ??? ? ????? ??? ????． ?????；????  浙江理工大学硕士学位论文 缩略语 乳糖苷 开放阅读框 ??????? 聚合酶链式反应 十二烷基硫酸钠 十二烷基硫酸钠．聚 丙烯酰胺凝胶电泳 吸光度 ??? ?????? ????? ? 二硫苏糖醇 ??．??????? ???? ??? 磷酸缓冲液 双蒸水 ?????? ?培养基 ?????????? 二硫苏糖醇 ??  浙江理工大学硕士学位论文 第一章文献综述 ??植物凝集素的研究 凝集素是一类具有高度特异性糖结合活性的蛋白，它能够可逆的结合单糖或 酶的蛋白质或糖蛋白，具有使细胞凝集或结合糖分子的特点。 ??????种子中发现了一 种蓖麻蛋白，它具有凝集兔、狗、猫等的红细胞的作用，这是人类首次发现的植 物凝集素，但是研究者认为这种蛋白是一种酶?】。随着天然产物的萃取纯化技 中分离纯化得到～种凝集素，命名为??，并首次证实了凝集素不是一种酶而 是一种蛋白质。凝集素分布广泛，到目前为止，凝集素的分布广泛，研究者已从 豆科、茄科、大戟科、禾本科、百合科、石蒜科、天南星科等植物中发现了?? 多种植物凝集素，其中已经纯化和鉴定的凝集素已有数百种，其中高等植物中约 有?％的植物含有凝集素。 ?????等；在块茎富集的有?????????、???、???、???、???、 ??等：在皮部富集的有????、????????、?????????????、 ?????、??????等；在种子富集的有?????????等；在叶中富 集的有??、??????????、???  浙江理工大学硕士学位论文 ? ?????? ?????? ??????声??? ???? ??? ??? ?????? ??? ?????? ????????????? ? ???? ???? ? ??? ???? ?? ?????? ??????? ? ?? ??????? ?? ?? ? ? ????口勿?? ???? ???  浙江理工大学硕士学位论文 最初发现的植物凝集素，包括蓖麻属???? ???????????为异四聚体蛋白，对哺乳动物和昆虫是有毒的；植物凝集 估相关研究显示出具有明显的安全性和有效性” ??? 植物凝集素的主要应用见表??，凝集素主要应用于生化、细胞生物、细胞  浙江理工大学硕士学位论文 表??植物凝集素在科学和医学科学中的应用 ????? ???? ?????? 生化 用薄层层析法或印迹法确定其糖原凝集素中糖基化位点 用亲和色谱法纯