第三章 提取和分离课件.pptVIP

基因工程需要三种不同的DNA:总DNA 质粒DNA 噬菌体DNA 学习内容： 制备细胞总DNA 培养、搜集细菌细胞 制备细胞提取物 DNA纯化、浓缩 从其他生物中提取总DNA 质粒DNA提取 根据分子大小分离 根据结构分离 质粒扩增 提取噬菌体DNA 噬菌体的培养 制备非溶源性噬菌体 收集噬菌体 从λ噬菌体中纯化DNA 纯化M13 DNA 1.制备总DNA 1.1培养、搜集细菌细胞 两种类型的细菌培养基的成分： M9培养基： Na2HPO4(6.0) KH2PO4(3.0) NaCl(0.5) NH4Cl(1.0) MgSO4(0.5) Glucose(2.0) CaCl2(0.015) LB培养基： Yeast extract(5) NaCl(10) 1.1培养、收集细菌细胞 1.2 制备细胞提取物 利用溶菌酶、EDTA或两者结合。 溶菌酶是存在于蛋清或眼泪、唾液等分泌物中，消化多聚物。 EDTA络合保持细胞结构完整的镁离子，也可以抑制细胞中降解DNA酶的活性。 一般溶菌酶或EDTA足以破坏细菌细胞，在提取液中同时还加入SDS。 1.制备细胞总DNA 1.4 DNA的浓缩与浓度测定 最常用的方法是乙醇沉淀（同时含有Na离子）。DNA沉淀可用玻璃棒挑出，或者离心沉淀。 260nm下测定吸光度，1OD相当于50μg双链DNA/ml。