基因工程中基因效表达研究是指外源基因在某种细胞中的表达活动.docVIP

基因工程中基因高效表达研究是指外源基因在某种细胞中的表达活动，即剪切下外源基因片段，拼接到另一个基因表达体系中，使其能获得原生物活性又可高产的表达产物。 外源基因表达系统由基因表达载体和相应的受体细胞两部分组成。 一．真核基因在原核细胞中表达，载体必须具备的条件： ⑴ 载体能够独立复制，具有复制起点。 ⑵ 应具有灵活的克隆位点和方便的筛选标记，以利于外源基因 的克隆鉴定和筛选。 ⑶ 应具有很强的启动子，能为大肠杆菌RNA聚合酶所识别。 ⑷ 应具有阻遏子，使启动子受到控制，只有当诱导时才能进行 转录。 ⑸应具有很强的终止子，只转录克隆的基因，所产生的mRNA 较为稳定。 ⑹所产生的mRNA必须具有翻译的起始信号AUG和SD序列， 以便转录后顺利翻译。 二．影响克隆基因在大肠杆菌中的表达效率因素： 5’-UTR对克隆基因表达效率的影响 a. 启动子结构对表达效率的影响 大肠杆菌启动子的保守序－35区（5’TTGACA）和－10(5’TATAAT)区；它们之间的距离(17bp)。 b. 启动子与克隆基因的间隔距离对表达效率的影响 当mRNA分子5’-末端与SD序列之间的长度小于15bp时，转译效率下降。 2.mRNA转录本的分子特性对基因表达效率的影响 a. 转译起始序列对表达效率的