04紫外-可见分光光度法2.pptVIP

10.3 紫外－可见分光光度计 10.3.1 紫外－可见分光光度计的主要部件 紫外－可见仪器光路图 用于提供足够强度和稳定的连续光谱。分光光度计中常用的光源有热辐射光源和气体放电光源两类。 2.单色器 色散元件主要是棱镜、光栅和滤光片。 棱镜 色散原理是依据不同的波长光通过棱镜时有不同的折射率而将不同波长的光分开。 棱镜的光学特性可用色散率和分辨率来表征； b. 线色散率： 用dl /dλ表示，两条相邻谱线在焦面上被分开的距离对波长的变化率； c. 倒线色散率：用dλ/dl 表示。 分辨率：相邻两条谱线分开程度的度量： 例如：某光谱仪在30000nm附近的分辨率为50000。 光栅 透射光栅，反射光栅； 光栅光谱的产生是光射到每一条槽上后被衍射或散射后，又在一定方向干涉，形成的各级衍射光谱。它可用于紫外、可见及红外光区，而且在整个波长区具有良好的、几乎均匀一致的分辨能力。 将反射光栅的线槽加工成适当形状能使有效强度集中在特定的衍射角上。 图所示反射光栅是由与光栅表面成β角的小斜 光栅的分辨率R 光栅的分辨率R 等于光谱级次（n）与光栅刻痕条数（N）的乘积： 狭缝 狭缝过宽，单色光不纯，造成偏离朗伯－比耳定律。 狭缝过窄，光通量变小，降低了灵敏度。 狭缝两边的边缘应锐利且位于同一平面上。 准直镜 使进入进口狭缝的发散光变成为平行光线，又将色散后的平行单色光聚集于出口狭缝。 可见光区：玻璃或石英池 紫外光区：石英池 盛空白、样品的吸收池，应有相同厚度和透光性。 光 电转换器 光电池 光电管 光电倍增管 光二极管阵列检测器 光电池： 特点：光电池内阻小，电流难放大，用微电流计直接测，适于单色光谱带宽S较大的低档仪器；易“疲劳”。 光电管： 光电倍增管 光二级管阵列检测器： 构造与原理： 晶体硅上紧密排列一系列光二极管检测器，光透过晶体硅时，二极管输出的电信号与光强成正比。 二极管数目越多，分辨率越高 特点：能进行快速光谱采集 例：HP8452A型二极管阵列，在190nm～820nm范围内，由316个二极管组成。每一个二极管，可在1/10秒内，每隔2nm测定一次，可同时并行测得316个数据，1/10秒就获得全光光谱。 二极管 1 2 3 …… 316 测定λ（nm）190 192 194 …… 820 5. 讯号处理与显示器 10.3.2 分光光度计的类型和光学性能 1.单光束分光光度计 结构与原理： 从光源到检测器只有一束光，用空白液调 T %= 100% 和测定试样液，都在同一位置，用同一束光先后进行。 特点： 结构简单，但对光源发光强度的稳定性要求较高。 2.双光束分光光度计 3.光多道二极管阵列检测的分光光度计 中档仪器的光学性能 短波长区校正：苯蒸气吸收光谱或苯乙醇光谱 中波长区校正：氢灯或氘灯发射谱线 常用486.13nm（F线）和 656.28nm（C线） 长波长区校正：镨钕玻璃的吸收光谱 苯蒸气在紫外光区有很特征的吸收峰，常用苯蒸气对波长进行校正。 镨钕玻璃滤光片的吸收光谱 常用K2CrO4标准溶液来校正吸光度标度。在进行吸光度测量时所用的吸收池要配对（样品池和参比池），否则要进行校正。 表：铬酸钾溶液的吸光度 使用一段时间后，磨损和污染会造成透光性能差异，必要时进行检查和校正。要求同一浓度的溶液在同一仪器上两次测量的误差应小于1% 10.4 紫外－可见分光光度分析方法 定性分析 定性鉴别 纯度检查和杂质限量测定 定量分析 单组分的定量方法 多组分的定量方法 10.4.1 定性鉴别 依据： 多数有机化合物具有紫外吸收光谱特征。 定性鉴别方法：对比法 例如：维生素B12的定性鉴别 c. 对比吸收光谱一致性 特别指出： 在相同条件下，具有相同吸收光谱的物质，可能是同一物质。 若在相同条件下，吸收光谱不同，则肯定不是同一物质。 图 三种甾体激素的紫外吸收光谱（10μg/ml甲醇） 10.4.2 纯度检查 1.杂质检查 2.杂质限量检查 例：肾上腺素中微量杂质 ——肾上腺酮含量