血清蛋白的分离——课件.pptVIP

聚丙烯酰胺凝胶电泳法 (1) 学习聚丙烯酰胺凝胶电泳原理。 (2) 掌握聚丙烯酰胺凝胶垂直板及圆盘电泳的操作技术。 聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺凝胶为载体的一种区带电泳。该凝胶由丙烯酰胺（Acr）和交联剂N，N—甲叉双丙烯聚酰胺（Bis）聚合而成。聚丙烯酰胺凝胶电泳利用电泳和分子筛的双重作用分离物质。 Acr和Bis单独存在或混合在一起时是稳定的，但在具有自由基团体系时就能聚合。引发自由基团的方法有化学法和光化学法两种。化学法的引发剂是过硫酸胺（Ap），催化剂是四甲基乙二胺（TEMED）；光化学法是以光敏感物核黄素来代替过硫酸胺，在紫外光照射下引发自由基团。 聚丙烯酰胺凝胶电泳的凝胶体系有连续和不连续电泳之分。不连续电泳系统由浓缩胶和分离胶两种胶体组成，两种胶体分别由不同的pH 的缓冲液和胶贮液配制而成，形成孔径不同的两种胶体。不连续电泳系统电泳分离过程中包括三种物理效应，即样品的浓缩效应、电泳分离的电荷效应和凝胶的分子筛效应。 本次试验采用不连续电泳系统PAGE，通过三种效应将血清中各蛋白质组分按其分子大小、电荷多少不同进行分离。 聚丙烯酰胺凝胶电泳有圆盘电泳和垂直板电泳之分，但两者的原理完全相同，只是所用的电泳槽不同。 由于时间问题，本次试验将分两组进行，一组使用圆盘，一组使用垂直板。 夹心式垂直板电泳槽，圆盘电泳槽，电泳仪，直流稳压电源，玻璃板（13×13