12.基因结构及其重组机理课件.ppt

第二节 同源重组 (五) Meselson-Radding模型 1975 三、同源重组机理 第二节 同源重组 11年后Holliday模型矛盾解决 ⑴切断骨架：产生单链切口 ⑵链置换：3 `延伸挤出老链 ⑶单链入侵：老链与上单体链联会，出现G/A单链泡，得三型子囊 ⑷泡切除：延伸后切除单链泡，获得三型子囊 ⑸吸收碎片链同化，获得三型子囊 ⑹异构，AT与GA扭曲得四型子囊 ⑺分支迁移，仍然产生四型子囊 1-7步过程中都有可能中断。所以，三型早而多，四型迟而少。 形成三型子囊 四型子囊 1-3，2-4扭曲 GC GC AT AT AT GC GA AT GA GC AT AT 1 2 3 5 4 6 7 (六)极化子与负干涉 三、同源重组机理 1.极化子(polaron) 基因转变频率从切点端开始向远端递减的现象称为极化；该基因转变频率递减的区间称为极化子。 2.负干涉(negative terference) 相临很近的基因受极化影响，双交换实际频率比理论频率还高的现象，称为负干涉。 Chistructur 基因转变频率递减区间 第二节 同源重组 四、细菌同源重组机理 (一)转化与接合重组机制 转化：DNA片段与细菌DNA之间联会、断裂、迁移、错接产生重组。切除外源DNA无重组，切除受体DNA有重组 接合：授供体细菌DNA之间联会、断裂、迁移、错接，产生重组。 需要RecA和RecBC参与 (二) 转导重组机制 细菌与DNA之间联会、断裂、迁移、错接，产生重组。 第二节 同源重组 第三节 位点专一性重组 一、位点专一性重组(site specific recombination) (二)特点 1、依赖位点专一性蛋白质因子 2、特定整合位点，需有15 bp以上同源序列 3、精确断裂、连接，发生不对等交换 (一)概念 依赖位点专一性蛋白在小范围同源序列中不对等交换重组。 bio基因 gal 基因 λ-DNA特定附着位点attP Ecoli特定附着位点attB 第三节 位点专一性重组 二、噬菌体整合与切除 (一)λ-DNA对E.coli的整合 POP’ + BOB’ →BOP’-POB’ P表示噬菌体附着位点 O表示同源核心序列 B表示细菌附着位点 ①需整合酶(Int,拓扑异构酶) ②需整合宿主因子(IHF) (二) λ-DNA从E.coli的切离 BOP’-POB’ → POP’ + BOB’ ①需要整合酶(Int) ②需整合宿主因子(IHF) ③需切除酶(Xis)参与 E.Coli特定附着位点attP，在bio与 gal基因之间， Int各断开1单链，旋转，交换，连接，形成Holliday，另两条单链间同样重组 E.Coli的attB有BOB ’3个序列 λ-DNA的attP有POP’3个序列 P附着位点(attP) attachment site P 第三节 位点专一性重组 二、噬菌体的整合和切除 (三)核心序列结构与识别 1.λ-DNAPOP’ 240bp 核心序列O：15bp，富含A-T，非对称序列 左序列P：160bp,-160~0 右序列P’： 80bp，0~80 2. E.Coli的BOB’ 23bp 左序列B：-11 ~0 右序列B’：0 ~11 核心序列O同λO 3. POP’与BOB’相互识别 (attP)核心序列与B(attB)相互识别 第四节 异常重组 一、异常重组(illegitimate recombination) (一)概念 依赖DNA复制完成重组，不依赖序列同源 (二)特点 1、依赖转座区域DNA复制完成重组 2、需要转座酶 3、不依赖序列同源 DS基因从中间位置转到C基因内 第四节 异常重组 二、原核生物转座子 (一)插入序列(IS，inserted sequence) 1.插入序列 携有转座酶基因、两端有反向重复序列的简单转座因子称插入序列。eg. E.coli中的IS1……IS11。能高频转座。 ２.插入序列突变的特点 ①突变体单链有颈环结构，即反向重复序列； ②突变体DNA比野生型密度梯度大，增加了一段DNA； ③不能核酸置换回复,非点突变 ④可自然回复，不是缺失 第四节 异常重组 二、原核生物转座子 (二) 转座子(Tn, transposon) 携有转座酶、抗性或其它基因，两端有反向重复序列(IS)的细菌,能高频转座。如YeastTn1……Tn9。 Tn3：携有tnpA、tnpR 、ampR基因，两端有38bpIR Tn9：携有camR(氯霉素抗性)基因，末端有23bpIR Tn9 第四节