牡丹皮中丹皮酚的薄层层析鉴别.docVIP

牡丹皮中丹皮酚的薄层层析鉴别 第一部分 方案设计 实验目的 1.中药的薄层定性鉴别自主设计和实验方法 2.掌握薄层色谱法在中药分析中的应用 3.掌握高效液相色谱仪在中药分析中的应用 实验原理 丹皮酚是牡丹皮主要挥发性成分之一，是一种小分子酚类化合物，化学名2-羟基-4-甲氧基苯乙酮，为白色或微黄色有光泽的针状结晶，熔点49~51℃，气味特殊、味微辣、易溶于乙醇和甲醇，在热水中溶解，不溶于冷水。 丹皮酚可吸收UV光，在硅胶GF254薄层板上形成暗斑，用对照药材与对照品进行对照，可起到鉴别牡丹皮中丹皮酚的作用。 利用高效液相色谱法进行丹皮酚的含量测定。分析时，为了减少实验条件波动对分析结果的影响，常采用随行外标一点法。 仪器与试剂 1.仪器 双槽层析缸、玻璃板10×10cm（厚3mm）、毛细管2μL、研钵、喷雾瓶50mL、电吹风、电子天平、三用紫外线分析仪、液相色谱仪、微量注射器、C18反相色谱柱、棕色量瓶（25mL,50mL）、吸量管、超声提取器。 2.试剂 硅胶GF254、氯化钠、三氯化铁、盐酸、甲醇、乙醇、环己烷、乙酸乙酯、重蒸馏水等。 3.试药 牡丹皮药材、丹皮酚对照品。 实验内容与步骤 （一）定性鉴别 1.硅胶GF254薄板的制作：称取硅胶GF2541份与3份0.3%的羟甲基纤维素钠放入研钵中，研匀，倒入涂布器中，进行涂布（厚度为0.25~0.5mm），取下涂好薄层的玻璃板，于温室下，置水平台上晾干，于110℃烘30分钟，冷却后放入干燥器中备用。 2.供试品制备：取本品粉末1g，加乙醚10ml，密塞，振摇10分钟，滤过，滤液挥干，残渣加丙酮2ml使溶解，作为供试品溶液。 3.对照品制备：取丹皮酚对照品，加丙酮制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。 4.点样：用毛细管吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G254薄层板上。 5.展开：以环己烷-乙酸乙酯(3：1)为展开剂，上行展开，其展距5~7cm。取出， 晾干。 6.显色：喷以盐酸酸性5％三氯化铁乙醇溶液，加热至斑点显色清晰。 7.检视：供试品色谱中，在与丹皮酚对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝褐色斑点。 （二） 含量测定 1. 色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(45：55)为流动相；检测波长为274nm。理论板数按丹皮酚峰计算应不低于5000。 2. 对照品溶液的制备：精密称取丹皮酚对照品适量，加甲醇制成每1ml含20μg的溶液，即得。 3. 供试品溶液的制备：取本品粗粉约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，摇匀，称定重量，超声处理(功率300W，频率50kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。 4. 测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，并计算含量。 注意事项 1.自制的薄层板应平整、均匀、无麻点、无气泡、无污损。 2. 展开用的层析缸要洗净烘干，放入板之前，要先加展开剂，盖上表面皿，让烧杯内形成一定的蒸气压。点样的一端要浸入展开剂0.5cm以上,但展开剂不可没过样品原点。当展开剂上升到距上端0.5－1cm时要及时将板取出，用铅笔标示出展开剂前沿的位置。 3.在使用高效液相色谱仪前，应了解仪器的结构、功能和操作程序。其开机时先打开工作站，排气泡后再连接泵，最后连接检测器，关闭程序与开机相反。 第二部分 综述 丹皮酚在现代医学中有广泛的应用价值。其具有镇痛、抗炎、解热和抑制变态反应的作用。对压尾、醋酸等物理或化学因素所致的疼痛，具有明显的镇痛作用。对由角叉菜胶、蛋清、甲醛、组胺、5－羟色胺、缓激肽、二甲苯及内毒素等所致的炎症反应，具有明显的抑制作用。对伤寒菌苗、三联疫苗等引起的体温升高，具有明显的解热作用。对II、III、IV型变态反应均具有抑制作用。 同时具有镇静、催眠、抗菌、抗炎、抗氧化、降血压等作用，在日化方面，丹皮酚能抑制细胞内O2-自由基产生，能使皮肤增白，将皮肤中沉积色素还原退色，消淤化斑；同时也具有消炎、消肿止痛、抗过敏、抗病毒等作用。对色斑、肌肉痛、皮肤瘙痒、牛皮癣、带状疮疹、湿疹具有较好的治疗和保健效果，此外，在牙膏、含漱液、牙粉、牙痛水中有较好的作用。所以对牡丹皮中丹皮酚的鉴别有很好的研究价值。 丹皮酚为白色或微黄色有光泽的针状结晶，无色针状结晶（