刺激隐核虫幼虫诱导斜带石斑鱼的体液免疫应答课件.pptVIP

毕 业 论 文 答 辩 刺激隐核虫幼虫诱导的斜带石斑鱼体液免疫应答 姓名：梁富 指导老师：但学名 目 录 实验目的 实验的材料与方法 实验的数据结果 实验讨论 一 . 实 验 目 的 刺激隐核虫是一种纤毛类寄生虫，对水产养殖和观赏鱼类造成了极大危害，在短时间内就会引发严重感染和高死亡率，对经济生产造成了很大的损失。 近几年来，关于鱼类对对刺激隐核虫的免疫应答引起了研究者的重视，刺激隐核虫幼虫免疫的石斑鱼血清和粘液中都发现了特异性抗体，并具有很好的免疫保护性 在感染后治疗过程中，相对于化学治疗来说，免疫接种的方法是一种更为安全和有效的措施。 刺激隐核虫的生活周期的四个阶段（见图示），我们采用的是Colorni和Burgess(1997)的术语：滋养体(trophont)、胞囊前体(protomont)、胞囊(tomont)和幼虫(theront)。 迄今为止，对刺激隐核虫生活史中各个阶段的免疫应答研究尚未见报道。 本文就刺激隐核虫的幼虫阶段所引起的体液免疫应答过程进行研究，以期能找到具有最高免疫原性和免疫保护性的免疫原，为以后疫苗的研制与开发奠定基础。 二.实验材料与方法 实验鱼的来源、检测及驯养 →刺激隐核虫幼虫的来源→ 实验分组→免疫方法→抗血清的制备方法→皮肤培养液的制备方法→血清抗体和皮肤培养液阻动效价的测定→幼虫对实验鱼致死剂量的测定→ 攻毒→数据统计方法。 三.实 验 结 果 抗体对幼虫的阻动过程 在阻动实验中，当幼虫加入含有抗体的抗血清或皮肤培养液中，一开始幼虫自由游动，慢慢地其纤毛相互交联，游动速度逐渐变缓，当它们游动过程中碰在一起时，彼此的纤毛粘在一起，造成虫体凝集，失去自由运动能力（图3-7），然后幼虫死亡，纤毛停止摆动，最后胞膜破裂，原生质外流。 抗血清阻动效价的变化规律 抗血清阻动效价的变化规律 在整个实验过程中对照组鱼的抗血清阻动效价水平都保持稳定，维持在0~1.2之间，证明该组实验鱼在实验中没有被刺激隐核虫感染过；幼虫注射组的实验鱼在接受初次免疫2周后血清抗体阻动效价就稍微上升，再次免疫2周后，血清抗体阻动效价急速上升，在第6周达到峰值，然后开始略微下降，第8~14周保持在一个较稳定的水平。 皮肤培养液阻动效价的变化规律 皮肤培养液阻动效价的变化规律 整个实验过程中对照组鱼的皮肤培养液阻动效价水平都维持在0~0.8之间，证明该组实验鱼在实验中没有被刺激隐核虫感染过；体表感染组的实验鱼在接受初次免疫2周后皮肤培养液阻动效价略有上升，再次免疫2周后，阻动效价显著上升，在第14周达到峰值。 抗血清和皮肤培养液阻动效价的变化差异 腹腔注射幼虫后，实验鱼的抗血清和皮肤培养液的阻动效价存在明显的差异：两者的最初生成时间、达到峰值的时间、变化规律等都不一致，并且在实验过程中，皮肤培养液的阻动效价一直显著低于抗血清的阻动效价。 致死剂量幼虫攻毒后各实验组鱼的死亡率 确定幼虫对卵形鲳鲹的致死剂量实验中，我们发现幼虫感染剂量达到20×103个幼虫.鱼-1时就可以让全部的鱼死亡，因此把致死剂量定为20×103个幼虫.鱼-1。经致死剂量幼虫感染后各组实验鱼的死亡情况如表3所示。结果显示，对照组的实验鱼在5 d之内全部死亡，而腹腔注射幼虫后最终死亡率为60%，降低了40%。 四.讨论与实验意义 本研究的结果显示，腹腔注射刺激隐核虫幼虫能使斜带石斑鱼的血清和皮肤培养液产生阻动隐核虫幼虫的特异性抗体，并能使免疫鱼获得很好的免疫保护，这意味着刺激隐核虫的全虫疫苗可以成为防治海水白点病的一个有效途径。 与腹腔注射刺激隐核虫滋养体和包囊相比较，幼虫引发的系统免疫应答强度（即抗血清的阻动效价）和皮肤粘膜免疫应答强度（即皮肤培养液的阻动效价）都显著增高，这说明幼虫的免疫抗原性要比滋养体和包囊强得多。 刺激隐核虫生活史的三个发育阶段中，只有幼虫期具有较好的免疫原性，而其它两个阶段免疫原性较差。可以将幼虫期作为首选来研制灭活疫苗，为防御和治疗刺激隐核虫病奠定了基础。所以，从我们的研究结果来看，刺激隐核虫病的预防和防治应该从幼虫期为出发，进行灭活疫苗疫苗或者基因工程疫苗的研究。 * * *