高效液相色谱--仪器分析实验教案.docVIP

仪器分析实验 课程教案 实验名称：高效液相色谱混合物的定量和定性测定 实验类型 验证性 教学时数 7 每组人数 8 一、实验目的及要求： 掌握高效液相色谱定性和定量分析的原理及方法； 了解高效液相色谱的构造、原理； 学习高效液相色谱仪的操作。 教学重点： 溶液配制的条件 2、色谱工作站参数的设定。 3、定量定性分析方法 教学难点： (1)、学习高效液相色谱的使用方法、了解该仪器的结构； (2)、定量定性分析方法 二、实验原理 高效液相色谱由储液器，泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成，储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动，经过反复多次的吸附—解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪。 三、主要仪器和试剂 主要仪器：液相色谱仪配有紫外检测器，Phenomenex ODS 柱]； 试剂：苯 教学内容及过程 （一）检查实验预习报告 （二）上次实验存在的问题 （三）高效液相色谱操作 （四）实验内容及步骤 A、溶液配制 1 配制标准系列溶液 三组分混标液：每mL溶液分别含5 uL苯、甲苯和丙酮。 分别准确移取0、2.50、5.00、10.00和20.00 uL甲苯容易溶于1.00mL甲醇中。 2 流动相的配制、过滤和除气。 标准苯测试液。 未知样品1号、2号、3号和4号。 B、上机测定 1 更换流动相。 2 按操作规定开动仪器，排气后让色谱柱平衡（流动性为80%甲醇，速度1.0 mL/min）。 3 设置色谱工作站参数。 Agilent HPLC仪 色谱柱： 流动相：甲醇：水=8：2 流速：1.0 mL/min 检测波长：254nm 进样体积：10μL 4 进样、采集色谱图。 1）三组分混标液 2）标准溶液系列 3）未知样品 5 色谱数据分析，打印色谱图及分析报告。 6 更换甲醇流动相，清洗色谱柱。 7 关闭仪器。 （五）提问 1、高效液相色谱溶液配制需要注意哪些操作？ 答：药品需要色谱纯的；配制好的溶液需要抽气处理——这步操作有些高效液相色谱能自动完成。 利用高效液相色谱进行定量和定性分析的依据有哪些？ 答：定性分析根据相同色谱系统下同一物质的保留时间相同；定量分析的依据是在一定浓度范围内，浓度与峰面积(或峰高)成正比。 （六）数据记录与结果处理 确定样品内的物质，确定样品中甲苯的浓度。 1）定性分析实验记录?2）定量分析实验记录丙酮浓度（ul/mL）峰面积（uV*s）标 标样2876718 标样3750275 标样4607851 丙酮标样标准曲线 课后小结： 本次仪器分析实验高效液相色谱混合物的定量和定性测定，学生通过仪器分析实验，基本了解高效液相色谱的性能及操作掌握的基本原理学习 Measures for the routine management of moral education in Middle SchoolsMethod of conventional management of moral education in middle schoolFirst, the guiding ideology:School moral education is an organic whole of the whole education work, always adhere to the school adhere to the moral education, education for this product, and actively promote the quality education, the school building efficient curriculum system of moral education, moral education, improve the sense of attraction and appeal, enhance the moral education work for through and timeliness. Teach everyone, service education and management education, and school moral education work must be with family education and community edu