柱层析、固相萃取和制备色谱课件.ppt

制备HPLC技术问题—条件的选择 从分析方法到制备方法的放大和方法的优化需要三个步骤： 　1. 优化分析方法的选择性。 2. 在分析柱上进行超量载样。 3. 放大到制备柱。 线性放大 非线性放大 制备HPLC技术问题—条件的选择 线性放大 指柱直径、长度（即柱体积）和流速等可以根据加样量的增加情况进行按比例线形放大。制备色谱中，最好的线形放大是在其他工艺条件不变的情况下，只改变柱子和流速，就可以放大生产，同时分离效果保持不变。成本比较大，同时也大大减少生产的产量和速度 非线性放大 制备HPLC技术问题—条件的选择 流速的调整 梯度洗脱 分离效果取决于梯度的选择，理论上梯度越小，分辨率越高。在分析上摸好条件，上制备柱往往还要降低一些洗脱液的浓度。 柱子再生 依次用水，甲醇，四氢呋喃，氯仿，甲醇来冲洗柱子，每种溶剂5-10个柱体积。 制备HPLC技术问题—条件的选择 1）制备的目的是在一次操作中尽可能地多上样，所以，首先得在分析柱上实现超载，否则，分析柱分离得再漂亮，再在制备柱中线性放大时就因为成本不合理而被无情地否决。 2）制备的目的是分离你所关心的组分，只要它能与其它杂质分离的好就行了，所以不要希望在分析柱上先得到所有组分的基线分离，完全没有必要！设计梯度时只需对目的物前后5-10%梯度的范围进行精细分离。 制备HPLC技术问题—条件的选择 3）制备中常常因为超载而无法使目的物与邻近杂质间达到基线分离，可以采用分段收集的方法得到指定纯度的目的物，要求越纯，单次操作的得率也越低。 4）制备中因为目的物来之不易，常常需要将纯度不合格得目的物重新上柱循环，一般只需稀释1-2倍就可以了。由于重新上柱是会增加成本的，所以超载的量要平衡单次操作的纯品得量和效益与返工成本，以单位纯品数量进行成本核算，以优化最佳上样量。 固相萃取技术SPE 一. SPE基本原理 二. SPE法的优点 三. SPE装置 四. SPE柱填料类型 五. SPE分析方法的建立 六. SPE的应用 SPE----基本原理 定义：利用固相吸附剂将液体样品中的目标化合物吸附，与样品的基体和干扰化合物分离，然后再用洗脱液洗脱，达到分离和和富集的目的。 分离：杂质保留或目标化合物保留。 富集：目标化合物保留，化合物极性与吸附剂极性越接近，保留越强。 分离机理：利用杂质或目标化合物与样品基体溶剂和吸附剂之间亲和力的相对大小。 SPE----基本原理 SPE也是一个柱色谱分离过程，分离机理、 固定相和溶剂的选择等方面与HPLC有许多相似之处。 SPE柱的填料粒径（40μm）要比HPLC填料（3-10μm）大。由于短的柱床和大的粒径，SPE柱效比HPLC色谱柱低得多。 SPE只能分开保留性质有很大差别的化合物。 SPE柱是一次性使用。 SPE---优点 许多分析方法中已经替代了液-液萃取  节省分析时间  减少有机溶剂的使用，不污染环境 高效、快速，可同时处理多个样品  提高分析质量，减少背景的干扰  提高了回收率 固相萃取所需时间为液－液萃取的1/2，费用为液－液萃取的1/5。 SPE柱 最简单的固相萃取装置就是一根直径为数毫米的小柱．由医用聚丙烯管，多孔筛板，填料三部分组成。 小柱可以是玻璃的，也可以是聚丙稀﹑聚乙烯﹑聚四氟乙烯等塑料的，还可以是不锈钢制成的。 规格：100mg/1mL， 200mg/3mL，300mg/3mL， 1g/6mL， 2g/12mL。。 SPE柱的选择 样品量 萃取柱的大小 1ml 1ml 1ml-250ml，且不要求萃取速度 3ml 1ml-250ml，要求快速萃取 6ml 　10ml-250ml，要求高样品容量 12，20或60ml 1L，且不要求萃取速度 12，20或60ml 1L和要求高样品容量 90mm 被萃取样品的质量不超过柱中填料量的5%！！ SPE柱及其配套装置 自然淋洗-----简易支架加正压 -----注射器加负压 -----真空装置 SPE常见填料类型 1.硅胶和键合硅胶 2.高分子聚合物 3.其他吸附型填料，如氧化铝、硅藻土 4.混合型或专用柱系列 SPE柱常见填料类型—硅胶表面 SPE常见填料类型—键合相硅胶 键合相硅胶，是在硅胶表面的硅醇基团上键合不同的有机基团，如烷基链或其它官能团，如-OH、-C6H5、-NH2、-CN等。实际上吸附剂角色是由这些新接上的含官能基碳链来完成。 SPE柱常用填料类型 按保留机理分为： 正相：Silica、NH2、CN、Diol