生物工程工程技术-3课件.ppt

第二节 细胞工程 细胞工程 细胞工程是指应用细胞生物学和分子生物学的原理和方法，通过某种工程学手段，在细胞整体水平或细胞器水平，按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质或获得细胞产品的一门综合科学技术。 一、细胞的全能性 细胞分化与细胞全能性之间的关系 ①一个受精卵发育成一个新个体，细胞除了经过有丝分裂使细胞数目增多以外，还必须经过细胞分化，使细胞在形态、结构和生理功能上均发生稳定性的差异，形成不同的细胞和组织。 细胞分化是一个渐变过程，在胚胎发育的早期，细胞外观上尚未出现明显变化前，细胞分化前途就已经决定，以后依次渐变，不能逆转，因此分化是一种持久的、稳定的变化。 ②由于体细胞是通过有丝分裂繁殖的，一般已分化的细胞都有一套与受精卵相同的染色体，携带有本物种的全部遗传信息，因此分化的细胞有发育成完整新个体的潜能，这就是细胞的全能性，因此，在合适的条件下，有些分化的细胞具有恢复分裂、重新分化发育成完整新个体的能力。 ③细胞具有全能性和全能性表达是两个不同的概念。 　　体内分化的植物细胞具有全能性，但在体内不能表达，需在一定条件下离体培养才能表达。 ④ 体内所有细胞中受精卵全能性最高，卵细胞比体细胞潜在的全能性高，分化的植物细胞比分化的动物细胞全能性易表达，但需一定条件下离体培养。 二、植物细胞工程 快速繁殖 概念：应用组织培养技术，快速繁殖植物（也叫快速繁殖技术） 原理：植物细胞的全能性 优点：繁殖率高，可大批量生产 取材少 培养周期短 保持优良性状 作物脱毒 病毒在作物体内逐年积累，会导致作物产量降低，品质变差 分生区附近（茎尖、根尖）的病毒极少，甚至没有 采用茎尖进行组织培养 人工种子 结构： 人工薄膜+胚状体（不定芽、顶芽、腋芽） 优点： 不受气候、季节、地域的限制 保留优良性状 时间短，占地少 技术： 组织培养 原理： 细胞全能性 2、植物体细胞杂交 植物体细胞杂交是用两个来自于不同植物的体细胞融合成一个杂种细胞，并且把杂种细胞培育成新的植物体的方法。 因为不同种生物之间存在着生殖隔离，所以用传统的有性杂交方法是不可能做到这一点的 。 3、植物体细胞杂交 植物体细胞杂交 过程示意图 植物体细胞杂交案例 植物体细胞杂交应用 常见的植物细胞培养有： 1、花粉培养 花粉或花粉洗涤后在培养基上剪碎，培养形成愈伤组织，分化形成根茎，生长为单倍体花粉植株，经加倍成为普通植株 花粉培养是目前育种重要手段之一 2、原生质体培养 去壁（纤维素酶、果胶酶） 细胞——原生质体——愈伤组织——根、茎——植株。 细胞融合，基因转移必须要在原生质体上进行。 二、细胞融合：（cell fusion） 创立于60年代，指在一定的条件下将两个或多个细胞融合为一个细胞的工程，细胞融合又称细胞杂交（cell hybridyixation）杂种细胞的形成范围较广，不仅动、植物种内或种间可杂交，而且动、植物之间也可杂交。 如：1970年蕃茄与马铃薯之间的原生质体融合成功及杂种植株（pomato)的育成。 以色列抗寒番茄的育成 植物组织培养的过程 4、植物细胞培养的应用 利用植物细胞培养进行药物生产 太平洋紫杉细胞生产抗癌药物-紫杉醇、人参细胞培养人参皂苷和人参多糖、毛地黄细胞培养转化毛地黄毒苷 典型案例：紫杉醇生产 C47H51NO14 分子量：853.92 案 例 1 紫杉醇(Paclitaxel)是继阿霉素和铂类抗癌药之后本世纪后期最受人们重视的一种抗癌新药，是一新发现的有丝分裂抑制剂，其作用机理在于阻止微管正常生理聚集，抑制癌细胞的有丝分裂和纺锤体的形成，从而使癌细胞的复制受到阻断而凋亡。 1967年美国化学家Wall和Wani等首先从太平洋紫 杉（短叶红豆杉，Taxus. brevifolia）树皮中提取出来。该药于1990年进入Ⅲ期临床试验， 1992年底获美国FDA批准上市。 紫杉醇存在于红豆杉属植物的树皮、叶及茎中， 其中树皮中的含量最高，大约从12000株成年紫杉树中才能提取1KG的紫杉醇，而且紫杉的生长周期很长，在世界分布很少。 紫杉醇的国际市场价格为450美元/g 日本有关组织从红豆杉中诱导产生愈伤组织，筛选得到细胞培养4周就增殖了5倍，紫杉醇的含量达到了0.05％，比树皮中紫杉醇的含量高达10倍。 Ketchum从6种紫杉醇属植物中进行愈伤组织的诱导，获得了产生紫杉醇的高产细胞株，在悬浮培养下，细胞内的紫杉醇含量超过了20mg/L。 清华大学化工系生物化工研究所通过固液两步培养法可以在4周内