蛋白质组样品制备程序..docVIP

蛋白质组样品制备程序 一、样品制备试剂的准备 二、细菌细胞样品的裂解处理步骤 三、人培养细胞样品的裂解处理步骤 四、膜蛋白裂解方法步骤 一、样品制备试剂的准备 裂解缓冲液储备液的准备 下述本样品制备方法已经过优化, 并被证明配合使用PF-2D 试剂盒可获得最佳的结果。您若选择其他的样品处理和细胞裂解方法，请务必避免使用离子型的表面活性剂、磺酸盐或者其它钠盐成份。建议也不能使用Triton X-100。 1）裂解缓冲液储备液中试剂组份的浓度： 尿素 (urea) (Sigma P/N: U0631) 7.5M 硫脲 （thiourea）(Sigma P/N:T7875) 2.5M 甘油（glycerol）(Sigma P/N:G6279) 12.5% Tris (Fisher, p/n: BP154-1,分子生物级) 50mM n-辛基葡糖苷 (n-octylgucoside)（Sigma P/N: O8001） 2.5%(用量很大) TCEP (Tris-(carboxyethyl)phosphine hydrochloride) (Sigma P/N: C4706) 6.25 mM 蛋白酶抑制剂 (Protease inhibitor cocktail in water for general use to inhibit the