高中生物： 31 酶的制备及活力测定（课件）中图版选修1.pptVIP

3.1 酶的制备及活力测定 实验目的和要求 1.掌握盐析法制备活性蛋白质的原理及方法。 2.掌握过氧化物酶的活力测定方法。 辣根过氧化物酶的制备及活力测定 过氧化物酶催化以下反应 2H 2 O 2 →O 2 +2H 2 O 这一类酶以铁卟啉为辅基，所以属血红素蛋白质类 (hemeproteins)。过氧化物酶在生物界分布极广，在细胞代谢的氧化还原过程中起重要的作用。 辣根过氧化物酶 (horse radish peroxidase，简称HRP，EC.1.11.1.7)是植物中研究得最深入的一种过氧化物酶，早在20世纪30年代就有人着手从辣根中分离此酶，以后又制备出结晶。本实验是以辣根为原料，经过水的抽提，硫酸铵和丙酮分级分离，再经锌离子纯化，透析除盐，冰冻干燥，便可得到高纯度的辣根过氧化物酶。 辣根过氧化物酶是一种含亚铁血红素的蛋白质 ,Mr在40 000左右，等电点7.2。溶于水，溶解度为5%(W/V)，溶液呈棕红色，透明。HRP可溶于0.58饱和度以下的硫酸铵溶液，而0.62饱和度以上则不溶。该酶最适pH7.0(对愈创木酚为氢给体而言)。在室温下，HRP几周内稳定，加热到63℃，在15min内稳定。氧化还原电势很低，pH6.08时，E 0 =-0.2070V，pH为7.71时，E ′ 0 =-0.2787V。  1.RZ值：提纯工作的后几步，以