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传染病检测技术在血液筛查中应用的现状 北京市红十字血液中心 邱艳 ?一、 血液筛查的发展历史 （PPT1）从血液筛查的发展历史可以看到，在二十世纪60年代，输血传染病高达25%。1970年发现了乙肝表面抗原，然后对其进行检测，输血后的感染率降到10%。1980年检测艾滋病病毒后，输血感染率继续下降，随后检查抗核抗体、丙肝等，输血感染率降到很低。 （PPT2）显示的是输血传染病的检测方法，1970年采用颗粒凝集法，1980年采用ELISA酶联免疫法，1990年采用化学发光法，目前多采用核酸法。 目前，输血感染率的残余风险逐渐降低，2001年达到百万分之几的概率。 二、HIV感染诊断 （一） HIV 感染诊断实验的种类 1. 抗体检测实验 间接酶联法测抗体 , 直接 ( 双抗原夹心 ) 法测抗体 , 快速诊断法检测抗体抗体确认试剂 , 其他抗体检测试剂。 2. 抗原检测实验：主要是检测 P24 抗原。 3. 抗原和抗体联合检测实验：与 ELISA抗体检测兼容性良好，成本低。 4. 核酸检测实验：核酸定性和定量检测实验。 （二）HIV检测的标记物 PPT6显示的是HIV的不同标志物。HIV感染后的10天以内是窗口期，不能检测出病毒。约5天后会出现P24抗原，即病毒核酸RNA复制，随后机体的免疫系统对其进行识别，会产生IgG、IgM。四十天后，会出现IgG抗体。这些标志物中，只有IgG抗体是稳定的。 （三） HIV 抗体检测方法 1.酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫荧光试验（IFA） ELISA最早用去污剂裂解HIV或感染细胞液提取物作抗原，IFA用感染细胞涂片作抗原进行抗体检测。 2.抗体确证实验 3.其他类抗体检测试验 （四）抗 -HIV EIA 检测试剂的发展 第一代是HIV-1病毒裂解产物，检测类型是IgG类抗体。第二代是HIV-1+2人工合成肽，检测类型是IgG类抗体。第三代是HIV-1+2基因重组，利用双抗原加锌法，检测IgG、IgM抗体，把窗口期缩短到三周。第四代是HIV-1+2基因重组，利用双抗原加锌法，检测IgG、IgM抗体与抗原，把窗口期缩短到两周。现在又加入核酸，可以缩短到一周之内，越来越安全。 （五）确证试验 初筛HIV阳性的，利用确证试验来确认。 确证试剂： 蛋白印迹法（Western Blot，WB）类确证试剂：抗原多为全病毒裂解抗原，用聚丙烯酰胺凝胶（SDS）电泳将HIV蛋白按其分子大小进行分离，将凝胶中的不同HIV蛋白条带电泳转移至硝酸纤维薄膜上，加入病人血清孵育后，用抗人球蛋白酶标抗体染色，检测针对不同结构蛋白抗体。这类试剂的抗原条带全，包括control带，膜区抗原gp160、gp120和gp41，核心抗原p55、p24和p17，聚合酶抗原p66、p51、p39和p31，还有HIV-2型特异性抗原，特异性较高。 喷膜类确证试剂：主要采用基因工程表达的抗原，其抗原条带没有全病毒裂解抗原全，但包含有主要的抗原条带，如LiaTek ? HIV-III确证试剂包含HIV-1型env区gp120和gp41,gag区p24和p17，pol区p31, HIV-2型env区的gp105和gp36。 （六）其它 HIV 抗体类检测 1.胶体金类快速检测 近几年开发了以胶体金或硒为标记物、以硝酸纤维素膜为载体、以层析形式进行固相免疫测定的技术，利用该技术制备了HIV抗体快速诊断试剂，该试剂稳定，可以在室温条件下保存一年或更长。操作简单而快速，数分钟即可得出结论，不需仪器设备，尤其适于单份测定等。但其灵敏度偏低 。 2.唾液HIV抗体检测 3.乳胶颗粒检测 4.尿液HIV抗体检测 （七） HIV 核酸检测 1.HIV 核酸定性检测：主要用于窗口期的早期诊断以及献血者的筛选。 2.HIV 核酸定量检测 3. HIV 核酸诊断试剂的种类 有雅培的、贝尔的、罗氏的试剂。 三、 抗 -HCV 检测 抗HCV检测主要用于献血源筛查以及实验室诊断。 （一） HCV 抗体筛查中的抗原决定簇 PPT18是HCV的结构基因。有核心区、包膜区，包膜区有一区、二区，非结构区NS2、3、4、5，然后这些区都会刺激机体产生抗体。第一代抗体只是针对细胞膜区来设计的。第二代抗体加大了NS3的检测。第三代抗体加入了NS3、NS4、NS5及核心区的检测。第四代增加了抗原的检测。 （二） RIBA ? HCV 3.0 1.用于筛查实验阳性（RR）样品的HCV抗体确认。 是为与高灵敏度的ORTHO HCV 3.0 ELISA 试剂相匹配而研发的确认试剂。 2.可辅助生化检测结果用于肝炎诊断。 3.独特的IgG（I/II）及hSOD内部质控设计。 4.用于检测的固相化抗原：重组表达蛋白：c33c、NS5；合成肽抗原：c100p（5-1-1p）、c22p。