免疫荧光染色SOP.docVIP

肾 活 检 冰 冻 切 片 免 疫 荧 光 染 色（ 直 接 法 ） 试剂 冷冻包埋剂OCT 荧光抗体：　IgG-FITC （1：100），IgA-FITC（1：200），IgM-FITC（1：300）， C3-FITC（1：100） ， C1q-FITC（1：150） PBS：欧蒙公司试剂盒中附带。（PH值为7.2 ） 4.封片甘油：欧蒙公司试剂盒中附带。（PH值为8.4 ） 二．取材 准备液氮罐、冷冻架、塑料小凹、OCT 活检标本取出后，立即浸入塑料小凹OCT中，置液氮罐内冷冻架上速冻约10秒 置恒冷切片机内立即行冰冻切片（切片厚度为3um） 三、固定 待冰冻切片充分干燥后，立即放入纯丙酮固定7min，吹干，收至低温冰箱保存。 固定后的冰冻切片已干燥，可直接染色，如从低温冰箱取出的冰冻切片，须充分吹干，方可染色。 四、抗原抗体反应过程 1. IgG , C3加一抗前用TBS孵育15min， IgA，IgM ，C1q 加一抗前用10%小牛血清封闭15min。（10%小牛血清为PBS稀释） 2. 去除多余液体，加稀释好的抗体，避光，湿盒内室温孵育40min 3. 流水冲洗，置95%酒精2min，吹干 4. 甘油封片，荧光显微镜观察结果 五、注意事项 冷冻标本时间要掌握好，防止过软或碎裂 切片温度需适宜，不宜过高