【高考必备】生物一轮教学案：专题29考点一　基因工程的工具与操作程序Word版含解析[精品原创].docVIP

第十一单元　现代生物科技专题 专题29　基因工程 考纲展示　命题探究 基础点 1　基因工程的基本工具 (1)限制性核酸内切酶 ①来源：主要从原核生物中分离。 ②作用：切断两个核苷酸之间的磷酸二酯键。 ③作用特点：专一性，即限制酶可识别特定的脱氧核苷酸序列，切割特定位点。 ④结果 (2)DNA连接酶 常用类型 E·coliDNA连接酶 T4DNA连接酶 来源 大肠杆菌 T4噬菌体 功能 连接黏性末端 连接黏性末端或平末端 结果 恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 注意点　DNA连接酶与限制酶的关系 (1)限制酶和DNA连接酶的作用部位都是磷酸二酯键。 (2)限制酶不切割自身DNA的原因是原核生物中不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰。 (3)限制酶是一类酶，而不是一种酶。 (4)DNA连接酶起作用时不需要模板。 (3)载体 ②其他载体：λ噬菌体衍生物、动植物病毒等。 2　基因工程的基本操作程序 (1)目的基因的获取 ①目的基因：编码蛋白质的基因。 ②获取方法：从基因文库中获取、利用PCR技术扩增目的基因、利用DNA合成仪人工合成。 (2)基因表达载体的构建——基因工程的核心 ①目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并可以遗传给下一代；使目的基因能够表达和发挥作用。 ②基因表达载体的组成：目的基因、启动子、终止子和标记基因等，如图。 (3)将目的基因导入受体细胞 (4)目的基因的检测和鉴定 ①检测：分子水平 ②鉴定：个体水平 重难点 1　基因、目的基因和基因文库 (1)基因是有遗传效应的DNA片段，是控制性状的遗传物质的结构和功能的基本单位，基因的脱氧核苷酸序列代表遗传信息。 (2)目的基因是指基因工程操作中需要的外源基因，它是编码某种蛋白质的结构基因，如生物的抗逆性基因、抗虫基因等。 (3)基因文库：是将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因。 2　基因表达载体中启动子、终止子的来源 (1)如果目的基因是从自然界中已有的物种中分离出来的，在构建基因表达载体时，不需要在质粒上目的基因的前后端接上特定的启动子、终止子，因为目的基因中已含有启动子、终止子。 (2)如果目的基因是通过人工方法合成的，或通过cDNA文库获得的，则目的基因是不含启动子和终止子的。若只将基因的编码序列导入受体生物中，目的基因没有启动子、终止子，是无法转录的，因此，在构建基因表达载体时，需要在与质粒结合之前，在目的基因的前后端接上特定的启动子、终止子。 3　目的基因导入不同受体细胞的过程 生物种类 植物 动物 微生物 常用方法 农杆菌转化法 显微注射技术 感受态细胞法 受体细胞 体细胞 受精卵 原核细胞 转化过程 将目的基因插入到Ti质粒的T－DNA上→转入农杆菌→导入植物细胞→整合到受体细胞的染色体DNA上→表达 将含有目的基因的表达载体提纯→取卵(受精卵)→显微注射→受精卵发育→获得具有新性状的动物 Ca2＋处理细胞→感受态细胞→重组表达载体DNA分子与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA分子 易错警示　基因工程操作程序易错点剖析 (1)基因表达载体≠载体：基因表达载体与载体相比增加了目的基因。 (2)目的基因的插入位点不是随意的：基因表达需要 启动子与终止子的调控，所以目的基因应插入到启动子与终止子之间的部位，若目的基因插入到启动子内部，启动子将失去原功能。 (3)启动子≠起始密码子，终止子≠终止密码子：启动子和终止子位于DNA片段上，分别控制转录过程的启动和终止；起始密码子和终止密码子位于mRNA上，分别控制翻译的启动和终止。 (4)切割目的基因和载体并非只能用同一种限制酶。如果用两种不同限制酶切割后形成的黏性末端相同时，在DNA连接酶的作用下目的基因与载体也可以连接起来。 (5)基因工程操作过程中只有第三步(将目的基因导入受体细胞)不涉及碱基互补配对现象：第一步存在反转录法获得DNA，第二步存在黏性末端连接现象，第四步存在检测分子水平杂交。 1．思维辨析 (1)限制性核酸内切酶、DNA连接酶和质粒是基因工程中常用的三种工具酶。(　　) (2)E·coliDNA连接酶既可以连接平末端，又可以连接黏性末端。(　　) (3)Taq酶是用PCR仪对DNA分子扩增过程中常用的一种耐高温的DNA连接酶。(　　) (4)携带链霉素抗性基因受体菌的筛选必须通过分子检测。(　　) (5)产生抗人白细胞介素－8抗体的杂交瘤细胞的筛选必须通过分子检测。(　　) (6)用PCR方法扩增目的基因时不必知道基因的全部序列。(　　) 答案　(1)×　(2)×　(3)×　(4)×　(5)√　(