镉对长江化溪蟹心脏组织器官的毒性作用及机制研究.docVIP

镉对长江化溪蟹心脏组织器官的毒性作用及机制研究 【摘要】：本学位论文综合采用光镜、电镜、酶学检测、流式细胞术、基因克隆、实时荧光定量PCR等手段与方法,以长江华溪蟹(Sinopotamonyangtsekiense)作为研究对象,采用急性毒性实验方法,研究了不同浓度镉暴露对心脏组织器官的影响,旨在阐明镉对心脏的毒性效应和致毒机制。为了研究镉对心脏组织器官的细胞与生化毒理学效应,就心肌细胞显微与亚显微结构进行了观察,并且检测了镉的蓄积、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)三种抗氧化酶的活力和脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的含量,探讨了心肌细胞结构改变和氧化应激之间的关系。在此基础上,为了求证镉对心脏造成氧化损伤后是否进一步诱导心肌细胞发生凋亡,分别采用Hoechst33258荧光染色法、琼脂糖凝胶电泳法、AnnexinV-FITC/PI流式细胞技术和Caspase-3酶活力测定的方法,检测了镉对心肌细胞凋亡的影响。之后,为了探明心脏对镉的应答反应,采用RT-PCR技术克隆得到了长江华溪蟹一种热休克蛋白70(SyHSP70)基因的部分cDNA序列,并利用实时荧光定量PCR技术检测了镉诱导SyHSP70和MTmRNA表达的变化特征。主要研究内容和结果如下：1、镉对长江华溪蟹主要组织器官细胞的影响采用石蜡切片和H.E.染色方法,研究了7.25、14.