TATEGFP融合蛋白的表达及在PC12细胞的转导活性.docVIP

TATEGFP融合蛋白的表达及在PC12细胞的转导活性 作者：王海珍 许予明 李增富 杨静 张云汉 【摘要】 　　目的： 构建pET28a重组子,观察表达的融合蛋白TAT在细胞内的转导活性. 方法： 人工合成编码TAT蛋白转导区的DNA片段，插入载体pET28a后再连接EGFP基因，组成pET28a重组表达子. 转化大肠杆菌，IPTG诱导TAT融合蛋白表达，组氨酸亲和层析柱纯化. 将融合蛋白加入培养的PC12细胞，观察荧光进入细胞的情况. 结果： 成功地构建了高表达pET28a重组子，纯化了分子质量约为29 ku的融合蛋白TAT并在体外培养的PC12细胞中证实TAT融合蛋白穿透生物膜的能力. 结论： 通过对TAT融合蛋白的表达纯化及活性分析,证实了TAT的蛋白转导作用，为肽类及生物大分子药物进入组织细胞内发挥治疗作用提供了理论基础. 【关键词】 TAT 蛋白转导结构域 重组融合蛋白质类 PC12细胞 0引言 随着生物工程技术的迅速发展,蛋白质与多肽类药物相继出现，但由于生物膜的屏障作用,只有少数小分子物质能进入组织，许多具有治疗作用的外源性生物大分子难以穿过生物膜在病灶达到有效浓度，从而给许多疾病的治疗造成困难. 近年来发现一种来源于人