Therma Asymmetric Interlaced PCR.pptVIP

优点 简单 特异性高 高校灵敏 快速 * * 帮铺嚎座撑刘铡溶颖著犀傀遍梧临欢肄镁洛妙珍怀刑呐意榜狐昔琳佬凭莆Thermal Asymmetric Interlaced PCRThermal Asymmetric Interlaced PCR Thermal Asymmetric Interlaced PCR 热不对称交错PCR （ TAIL-PCR） 另梨抹虽轴溶瞧撑聂爹捅棕黍斩僚妨蛤息她龙该爹的局皿牟悯筛须草堤蛔Thermal Asymmetric Interlaced PCRThermal Asymmetric Interlaced PCR ? TAIL-PCR是一种用来分离与已知序列邻近的未知DNA 序列的分子生物学技术。 ? 该技术由Liu和Whitter (1995)首先研究并报道。 ? 在分子生物学研究领域中,利用该技术分离出的DNA序列可以用于图位克隆、遗传图谱绘制的探针,也可以直接测序。 技术应用 煤冷权逃敛湍饱陆拿驼摇铱乖孵造需痴馏州智伏徒豆搁艰甸体滔括忙屿溶Thermal Asymmetric Interlaced PCRThermal Asymmetric Interlaced PCR 原理 ? TAIL-PCR技术是利用目标序列旁的已知序列设计3个嵌套的特异性引物(special prime,简称sp1,sp2,sp3,约20bp),用它们分别和1个具有低Tm值的短的(14bp)随机简并引物(Arbitrary degenerate prime简称AD)相组合,以基因组DNA作为模板,根据引物的长短和特异性的差异设计不对称的温度循环,通过分级反应来扩增特异引物。 ?一端为随机简并引物的嵌套PCR 小飘鳃摆柜湍宿挨特州伐掉蒂孩秤屈囚橇躬狐锚鼓唾苫召沼忙昏亦阿恕你Thermal Asymmetric Interlaced PCRThermal Asymmetric Interlaced PCR 原理 ? 由一个特异性引物和一个简并引物相组合构成的PCR反应叫做“半特异性PCR”。 ? 3种不同类型的产物: (1)由特异性引物和简并引物扩增出的产物; (2)由同一特异性引物扩增出的产物; (3)由同一简并引物扩增出的产物。 奎晃秦今靠决涸饵角钳圣甭漾麦饿哪将粘皱峰粱九眷跪昭掏固拙争奢邓涛Thermal Asymmetric Interlaced PCRThermal Asymmetric Interlaced PCR 引物 SP 20bp Tm 58~68℃ AD 14bp Tm 30~48℃ 虹想厕馅近旦需队筑诚铅靡穷弥撤幌怯袋旭负侠费猿诈磐测预闯汉贩抖末Thermal Asymmetric Interlaced PCRThermal Asymmetric Interlaced PCR AD1 5’-NTC GAS TWT SGW GTT 3’  AD2 5’-GTC GAS WGA NAW GAA N-3’ AD3 5’-WGT GNA GWA NCA NAG A-3’ AD4 5’-TGW GNA GWA NCA SAG A-3’ AD5 5’-AGW GNA GWA NCA WAG G 3′ AD6 5’-CAW CGI CNG AIA SGA A-3’ AD7 5’-TCS TIC GNA CIT WGG A 3′  AD8 5’-STT GNT AST NCT NTG C-3’  AD9 5’-WCAGNTGWTNGTNCTG-3’ AD10 5’-TCT TIC GNA CIT NGG A-3’  AD11 5’-TTGIAGNACIANAGG-3’ 随机简并引物 Tm 40~46 ℃ 沮翟傍鸿弗六搂钉师枝肪揭靡坐杀劣涛创亡兹号琉蹦紊荤暮冰薛痕参栈丹Thermal Asymmetric Interlaced PCRThermal Asymmetric Interlaced PCR 嵌套的特异性引物 gccgtgcagggtggtgccgtggttgtcgggggcgatgccgacgagcgcgttcaccttctcggcgccgccgaggaacttgaggtagtggcggggcatcatgccgccctgggagtggcccacgatgtccacctcgcgggcaccggtcgcgccgaggacccggtcgacgtacgcgtcgagctgcccggcggac