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丁酸钠对食管癌细胞增殖的影响 作者：尹惠卿　张岚　贺付成　张云汉　高冬玲 【摘要】 目的: 观察丁酸钠对食管癌EC9706细胞增殖、细胞周期及NDRG1蛋白表达的影响. 方法: 采用 mmol/L丁酸钠作用于食管癌EC9706细胞, 用MTT法检测处理不同时间时细胞增殖的变化，采用流式细胞仪检测细胞周期的变化，采用免疫组化方法检测NDRG1蛋白表达的变化. 结果: ①MTT实验结果显示，丁酸钠作用1～5 d时各组吸光度均低于对照组，经统计学处理差异有显著性意义；丁酸钠不同作用时间的细胞增殖抑制率分别为：1 d组%，3 d组%，5 d组%，且随作用时间延长抑制率升高. ②细胞周期检测结果为: G1期细胞:对照组±，1 d组±，3 d组±，5 d组±；S期细胞：对照组±，1 d组±，3 d组±，5 d组±；M期细胞：对照组±，1 d组±，3 d组±，5 d组± 各组G1期结果分别与对照组结果比较，差异有显著性意义. ③丁酸钠可上调NDRG1蛋白表达水平，随作用时间增长蛋白表达增强. 结论: 丁酸钠可抑制食管癌细胞增殖，这一作用可能与NDRG1蛋白表达增加有关. 【关键词】 食管肿瘤；肿瘤细胞；NDRG1基因；丁酸钠 0引言 　　 　　丁酸钠是一种四碳脂肪酸盐，是重要的肠道黏膜营养剂. 研究证实丁酸钠能抑制胃癌、肝癌、结肠癌等肿瘤细胞增殖, 促进肿瘤细胞分化，改变瘤细胞形态结构及基因表达，诱导细胞凋亡［1-3］，因而丁酸钠作为一种极具潜力的抗癌药物越来越受到关注. NDRG1基因是一种与细胞分化有关的基因，升高其表达可抑制肿瘤细胞的增殖［4-5］. 我们采用MTT实验及流式细胞技术检测丁酸钠作用于食管癌EC9706细胞后细胞增殖和细胞周期的变化，并观察丁酸钠对NDRG1表达的影响，为丁酸钠用于食管癌诱导分化治疗提供理论依据. 1材料和方法 材料 食管癌EC9706细胞系由中国医学科学院肿瘤医院分子肿瘤学国家重点实验室赠送. 丁酸钠，RPMI 1640细胞培养基,胎牛血清，羊抗人NDRG1多克隆抗体，丫啶橙，CO2孵育箱，流式细胞仪，Fax酶标仪. 　 　　方法 细胞培养 将人食管癌EC9706细胞单层贴壁生长于含100 mL/L胎牛血清的RPMI 1640培养液中，种植于含盖玻片的六孔板及75 cm2培养瓶中. 37℃, 50 mL/L CO2培养箱中培养，隔日换液，取对数生长期细胞进行试验. 实验 取对数生长期的EC9706细胞,调整细胞密度为×107/L,按每孔 mL接种于96孔细胞培养板中. 设空白对照组和 mmoL/L丁酸钠实验组,每组均设10个复孔. 实验终止前4 h向细胞液中加入MTT 20 μL,细胞被染色后以二甲亚砜200 μL溶解甲瓒颗粒,于酶标仪上测定A492 nm. 实验重复2次. 细胞抑制率= ［/A对照］×100%. 丁酸钠处理及细胞周期检测 用RPMI 1640培养液将丁酸钠调终浓度为 mmol/L,对照组为不含丁酸钠的培养液. 取丁酸钠作用1, 3, 5 d的细胞爬片及对照组细胞爬片从六孔板取出后经pH 的PBS冲洗，800 mL/L丙酮固定30 min后用中性树胶黏于载玻片上，4℃保存，用于免疫组化实验. 分别取丁酸钠作用1, 3, 5 d的细胞进行如下处理：培养瓶中的细胞经pH 的PBS冲洗后加入2 g/L胰蛋白酶消化，离心后用预冷的PBS洗涤2次，加入700 mL/L乙醇 mL固定细胞用于细胞周期测定. 上机前将细胞离心洗涤制成单细胞悬液,加丫啶橙染色,暗室放置,300目尼龙膜过滤,用流式细胞仪检测细胞周期分布. 细胞免疫组织化学染色 采用SP试剂盒进行免疫组化实验. 按说明书步骤进行操作，DAB显色，苏木素复染，光镜观察细胞显色强度. 结果判定：在高倍镜下观察免疫组化着色情况，以信号强弱评定NDRG1表达的强弱. 统计学处理： 采用SPSS 软件进行统计学处理，数据均采用x±s表示,检验水准α= 2结果 检测不同时间的各组平均吸光度值均低于对照组，其差异有显著性意义；随丁酸钠作用时间延长，其抑制率升高.表1丁酸钠对人食管癌细胞EC9706的增殖抑制作用确良 丁酸钠对食管癌细胞细胞周期的影响 实验组G1期细胞比例与对照组比较明显增高,而S,M期细胞比例减少，经统计学处理，差异有显著性意义.表2丁酸钠对食管癌EC9706细胞周期的影响 丁酸钠对食管癌细胞NDRG1蛋白表达的影响 免疫组化染色结果显示，在作用1～5 d时，细胞胞质黄色着色较对