人天然免疫分子Tetherin基因的克隆表达及其对流感病毒增殖的影响.docVIP

人天然免疫分子Tethein基因的克隆表达及其对流感病毒增殖的影响 邓玉雪，李 蕊，张 驰，代剑平，陈小璇，王革非，李康生 (汕头大学医学院微生物学与免疫学教研室，广东省高校免疫病理学重点实验室，广东 汕头 515041) 摘要目的：人天然免疫分子Tethein(BST-2, CD317，HM1.24)的基因克隆，构建含Tetherin基因的真核表达载体，并研究其抗病毒作用及与流感病毒增殖的关系。 方法：根据Tetherin基因核苷酸序列设计合成一对引物，从健康人外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells, PBMC）中分离制备外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocyte,PBL)，进一步抽提RNA进行反转录-聚合酶链反应（RT-PCR），扩增产物用KpnI和BamHI 双酶切插入真核细胞表达载体PC-FLAG载体中，用限制性内切酶酶切质粒及DNA序列测定进行鉴定证实。脂质体转染Tetherin基因并导入MDCK细胞，通过间接免疫荧光检测Tetherin蛋白在细胞中的定位。利用流感病毒PR8病毒空斑形成实验检测Tetherin与流感病毒增殖的关系结果：RT-PCR扩增出长543bp的片段，成功克隆了Tetherin基因。免疫荧光结果表明，Tetherin定位于细胞膜。流感病毒PR8病毒空斑形成实验提示在转染与未