实验七 人类染色体课件.ppt

实验七 人类染色体G显带技术及G带核型分析 一、实验目的 1、初步掌握染色体G带标本的制备技术。 2、了解人类染色体的G显带的带型特征。 二、实验原理 人们将用各种不同的方法，以及用不同的染料处理染色体标本后，使每条染色体上出现明暗相间，或深浅不同带纹的技术称为显带技术（banding technique）。本世纪70年代以来，显带技术得到了很大发展，且在众多的显带技术中（Q带、G带、C带、R带、T带），G带是目前被广泛应用的一种带型。因为它主要是被Giemsa染料染色后而显带，故称之为G显带技术，其所显示的带纹分布在整个染色体上。 研究发现，人染色体标本经胰蛋白酶、NaOH、柠檬酸盐或尿素等试剂处理后，再用Giemsa染色，可使每条染色体上显示出深浅交替的横纹，这就是染色体的G带。每条染色体都有其较为恒定的带纹特征，所以G显带后，可以较为准确的识别每条染色体，并可发现染色体上较细微的结构畸变。 关于G显带的机理目前有多种说法，例如，Lee等（1973）认为染色体上与DNA结合疏松的组蛋白易被胰蛋白酶分解掉，染色后这些区段成为浅带，而那些组蛋白和DNA结合牢固的区段可被染成深带。 有人认为，染色体显带现象是染色体本身存在着带的结构。比如用相差显微镜观察未染色的染色体时，就能直接观察到带的存在。用特殊方法处理后，再用染料染色，则带更加清楚，随显带方法不同，显出来的带特点也不一样，说明带的出现又与染料特异结合有关。一般认为，易着色的阳性带为含有AT多的染色体节段，相反，含GC多的染色体段则不易着色。总的来说，G显带的机理还未搞清。 三、实验用品 1、材料：常规方法制备的中期人类染色体标本（标本片龄不超过30天为宜）。 2、器材：显微镜、恒温培养箱、烤箱、恒温水浴箱、冰箱、染色缸、小镊子、玻片架、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸。 3、试剂：0.125％胰蛋白酶溶液、0.02％EDTA溶液、胰蛋白酶一EDTA混合液、0.85％生理盐水、蒸馏水、Giemsa原液、Giemsa稀释液、1／15 mol ／L磷酸缓冲液。 四、实验步骤 （一）人类染色体G显带标本制备 1、胰蛋白酶法 ①将常规制备的人染色体玻片标本（未染色的白片）置70℃烤箱中处理2小时，然后转入37℃培养箱中备用，一般在第3～7天进行显带。 ②取2.5％的胰蛋白酶原液2.5ml加生理盐水至50ml，配成0.125％的工作液并用NaHCO3调pH值至7左右。 ③将配好的胰蛋白酶工作液放入37℃水浴箱中预热。 ④取出标本立即浸入生理盐水中洗两次。 ⑤浸入37℃的Giemsa染液中染色5～10分钟。 ⑥细水冲洗后晾干、镜检。 2、EDTA一胰蛋白酶法 ①取25ml GKN(或生理盐水）和25ml 0.02％的EDTA溶液倒入立式染色缸中混匀。 ②取2.5％的胰蛋白酶原液1ml加入到上液中混匀，并用5％NaHCO3调pH值至7左右。置水浴箱预温至37℃。 ③将染色体标本片浸入胰蛋白酶一EDTA溶液中处理5～20秒，同时轻轻摇动玻片。 ④取出标本立即浸入生理盐水中洗两次。 ⑤浸入37℃的Giemsa染液中染色5～10分钟。 ⑥细水冲洗后晾干、镜检。 四、实验结果 根据染色体的形态、大小及着丝粒的位置，将染色体分为七组： A组染色体：包括1～3号染色体。长度最长，1号和3号染色体为中央着丝粒，2号染色体为亚中央着丝粒染色体。 B组染色体：包括4～5号染色体，长度次于A组；亚中央着丝粒染色体，短臂较短。 C组染色体：包括6～12号和X染色体，中等长度，亚中央着丝粒染色体。  D组染色体：包括13～15号染色体，具有近端着丝粒和随体。 E组染色体：包括16～18号染色体，16号染色体着丝粒在 3/8处，17号和 18号染色体着丝粒约在 1/4处。 F组染色体：包括19号和20号染色体，中央着丝粒。 G组染色体：包括21号、22号和Y染色体，是染色体组中最小的，为近端着丝粒的染色体。21号和22号染色体具有随体。 正常人各染色体的G带特征 A组：1～3号染色体。 1号染色体。 短臂：近侧段有2条深带，第2深带稍宽，在处理较好的标本上，远侧段可显出3～4条淡染的深带。此臂分为3个区，近侧的第1深带为lp 21；第2深带为1p31。 长臂：副缢痕紧贴着丝粒，染色浓。其远侧为一宽的浅带，近中段与远侧段各有两条深带，此中段第2深带染色较浓，中段两条深带稍靠近，此臂 分为4个区，副缢痕远侧的浅带为lp21号带、中段第2深带为lp31号带，远侧段第1深带为lp41号带。 2号染色体。 短臂：可见4条深带，中段的2条深带稍靠近，此臂分为2个区，中段两条深带之间的浅带为2p21。 长臂：可见7条深带，第3和第4深带有时融合。此臂分为3个区，第2和第3深带之间的浅带为2p21带，第4