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实验二 人类外周血淋巴细胞培养 及染色体标本的制备 目的要求 1、学习人类外周血淋巴细胞的培养技术。 2、掌握人类淋巴细胞染色体标本的制备。 实验原理 有丝分裂中期相的染色体具有一定形态和大小，且轮廓结构最为典型。 1952年美籍华人徐道觉发现低渗可以使细胞膨胀，染色体分散。 1956年美籍华人蒋有兴和Leran等人，在染色体制片中利用了可以破坏纺锤丝使细胞分裂停止在中期的秋水仙素。 1960年Nowell等人发现植物凝集素（简称PHA）可以使处于G1期或G0期的淋巴细胞转化为淋巴母细胞，从而进入分裂期。 在制备人类染色体标本时，外周血淋巴细胞常做为首选材料。 正常人体的染色体由常染色体和性染色体 组成： 作业和讨论 观察人类染色体的形态、结构特点。 在该实验中，PHA、秋水仙素有何作用？ 要制备出质量良好的人淋巴细胞染色体标本，需注意哪些问题？ * 1912 温州医学院生命科学学院生物系 戴显宁 教材92页 46 + XX 46 + XY 染色体畸变的后果 2. 男女不育不孕症 如：克氏综合征导致男性无精症、少精等。 1. 先天缺陷 如：生长发育迟缓、智力低下、特征性异常体征等 4. 携带者 ...... 3. 自发流产 加固定液至5ml,固定15’ 加固定液至5ml,固定15’ 5ml培养液+0.5ml血 70h 加秋水仙素 继续培养至72h 收集细胞 1500rpm, 8’ 弃上清 37℃0.075M KCl 6ml,混匀 37℃,水浴15’ 预固定 (加固定液1ml,轻混匀) 1500rpm,8’ 1500rpm,8’ 制备Ⅱ号片 (滴片) Ⅱ号片染色5’,水洗 镜检 弃上清 弃上清 沉淀 沉淀 1500rpm,8’ 弃上清 正常人类染色体各组的主要形态 最小 次小 小 中等 中等 次大 最大 形态 21、22有、Y无 近端着丝粒 21-22+Y G 无 中央着丝粒 19-20 F 17、18号亚中着丝粒 无 16号中央着丝粒 16-18 E 有 近端着丝粒 13-15 D 无 亚中着丝粒 6-12+X C 无 亚中着丝粒 4-5 B 2号亚中着丝粒 无 1、3号中央着丝粒 1-3 A 随体 着丝粒位置 染色 体号 组号 注意事项 1、两人一组，每组一个培养瓶，共制备四张染色体标本，每张玻片请标上Ⅰ。 2、离心前要配平，离心速度过高，细胞团不易打散；反之，细胞易丢失。实验过程中对低速离心机的使用和制片进行考核。 3、低渗使红细胞膜破裂，淋巴细胞膨胀，低渗处理浓度及时间要适当。且低渗后混匀细胞一定要轻，否则引起膜破裂、染色体散失。
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