实验五 薄层色谱实验课件.ppt

色谱识别：日光下观察，供试品色谱中部可见与熊果酸对照品相同的紫红色斑点为主斑。紫外光灯下的荧光色谱除熊果酸显橙黄色荧光斑点外，尚有其他荧光斑点，可供辅助鉴别。 五、实验讨论： 载玻片应干净且不被手污染，吸附剂在玻片上应均匀平整。 点样不能戳破薄层板面，各样点间距1- 1.5cm，样点直径应不超过2mm。 展开时，不要让展开剂前沿上升至底线。否则，无法确定展开剂上升高度，即无法求得Rf值和准确判断粗产物中各组分在薄层板上的相对位置。 显色加热时间不宜过长，否则薄层板表面易炭化而背景被污染。 六、思考题 如何利用Rf值来鉴定化合物？ 薄层色谱法点样应注意些什么？ 常用的薄层色谱的显色剂是什么？ 一、实验目的 1、掌握薄层色谱的操作技术。 2、了解薄层色谱的基本原理和应用。 二、实验原理： 1、原理 薄层色谱(Thin Layer Chromatography)常用 TLC表示，又称薄层层析，属于固－液吸附色谱。样品在薄层板上的吸附剂（固定相）和溶剂（移动相）之间进行分离。由于各种化合物的吸附能力各不相同，在展开剂上移时，它们进行不同程度的解吸，从而达到分离的目的。 2、薄层色谱的用途： 1）化合物的定性检验。（通过与已知标准物对比 的方法进行未知物的鉴定）在条件完全一致的情况，纯碎的化合物在薄层色谱中呈现一定的移动距离，称比移值（Rf值），所以利用薄层色谱法可以鉴定化合物的纯度或确定两种性质相似的化合物是否为同一物质。 影响比移值的因素很多，如薄层的厚度，吸附剂颗粒的大小，酸碱性，活性等级，外界温度和展开剂纯度、组成、挥发性等。所以，要获得重现的比移值就比较困难。为此，在测定某一试样时，最好用已知样、品进行对照。 2、快速分离少量物质（几到几十微 克，甚至0.01μg） 3、跟踪反应进程 在进行化学反应 时，常利用薄层色谱观察原料斑点 的逐步消失，来判断反应是否完成。 4、化合物纯度的检验（只出现一个斑 点，且无拖尾现象，为纯物质） 三、实验装置 薄层板 玻璃板 上涂吸附剂层 SiO2 Al2O3 上行法 薄层板 层析缸 展开剂 层析缸 展开剂 滤纸条 下行法 薄层板 1.薄层板的制法； 2.薄层色谱活化； 3.薄层色谱点样； 4.薄层色谱展开； 5.薄层色谱显色与分析； 四、实验步骤： 1、吸附剂的选择 薄层色谱的吸附剂最常用的是氧化铝和硅胶。 1）硅胶： “硅胶H”—不含粘合剂； “硅胶G”—含煅石膏粘合剂； 其颗粒大小一般为260目以上。颗粒太大，展开剂 移动速度快，分离效果不好；反之，颗粒太小溶 剂移动太慢，斑点不集中，效果也不理想。 四、实验步骤： 对化合物的吸附能力与它们的极性成正比，具有较大极性的化合物吸附较强，因而Rf值较小。 酸和碱 醇、胺、硫醇 酯、醛、酮 芳香族化合物 卤代物、醚 烯 饱和烃 本实验选择的吸附剂为薄层色谱用硅胶G。 2、薄层板的制备： 薄层板制备的好坏直接影响色谱的结果。薄层 应尽量均匀且厚度要固定。否则，在展开时前 沿不齐，色谱结果也不易重复。在烧杯中放入 2g硅胶G，加入5—6ml0.5%的羧甲基纤维素钠水 溶液，调成糊状。 将配制好的浆料倾注到清洁干燥的载玻片上， 拿在手中轻轻的左右摇晃，使其表面均匀平滑， 在室温下晾干后进行活化。 本实验用此法制备薄层板4片。 3、薄层板的活化 将涂布好的薄层板置于室温凉干后，放在烘箱内加热活化，活化条件根据需要而定。硅胶板一般在烘箱中渐渐升温，维持105—110℃活化30min。氧化铝板在200℃烘4h可得到活性为Ⅱ级的薄板，在150—160℃烘4h可得活性为Ⅲ—Ⅳ级的薄板。 活化后的薄层板放在干燥器内保存待用。 4、点样 先用铅笔在距薄层板一端 1cm处轻轻划一横线作为 起始线，然后用毛细管吸 取样品，在起始线上小心点样，斑点直径一般不超过2mm。 若因样品溶液太稀，可重复点样，但应待前次点样的溶剂挥发后方可重新点样，以防样点过大，造成拖尾、扩散等现象，而影响分离效果。若在同一板上点几个样，样点间距离应为1。 点样要轻，不可刺破薄层。 5、展开 薄层色谱的展开，需要在密闭容器中进行。在层析缸中加入配好的展开溶剂，使其高度不超过1cm。将点好的薄层板小心放入层析缸中，点样一端朝下，浸入展开剂中。盖好瓶盖，观察展开剂前沿上升到一定高度时取出，尽快在板上标上展开剂前沿位置。 晾干，观察斑点位置，计算Rf值。 在特定的色谱系统中，化合物 的Rf值是一定的，比较未知物 和标准物的Rf值能够作为鉴定 未知物的依据。 溶剂前沿 溶质最高浓度中心 原点中心 溶质最高浓度中心至原点中心距离 溶质前沿至原点中心距离 Rf值计算示意图 薄层色谱流动相及展开机制 T