读分子克隆实成验读操作.docVIP

目录第一章 质粒DNA的分离、纯化和鉴定第二章 DNA酶切及凝胶电泳 第三章 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 第四章 RNA的提取和cDNA合成 第五章　重组质粒的连接、转化及筛选 第六章 基因组DNA的提取 第七章 RFLP和RAPD技术 第八章 聚合酶链式反应(PCR)扩增和扩增产物克隆 第九章 分子杂交技术 第十章 测序技术 质粒DNA的分离、纯化和鉴定 第一节 概 述 　　把一个有用的目的DNA片段通过重组DNA技术,送进受体细胞中去进行繁殖和表达的工具叫载体(Vector)。细菌质粒是重组DNA技术中常用的载体。 　　质粒(Plasmid)是一种染色体外的稳定遗传因子,大小从1-200kb不等,为双链、闭环的DNA分子,并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中，它具有自主复制和转录能力,能在子代细胞中保持恒定的拷贝数,并表达所携带的遗传信息。质粒的复制和转录要依赖于宿主细胞编码的某些酶和蛋白质，如离开宿主细胞则不能存活,而宿主即使没有它们也可以正常存活。质粒的存在使宿主具有一些额外的特性,如对抗生素的抗性等。F质粒(又称F因子或性质粒)、R质粒(抗药性因子)和Col质粒(产大肠杆菌素因子)等都是常见的天然质粒。 　　质粒在细胞内的复制一般有两种类型:紧密控制型(Stringent control)和松驰控制型(R