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胰蛋白酶抑制剂对人肝癌HepG2细胞的增殖和迁移的影响
摘要:目的:体外研究尿胰蛋白酶抑制剂(urinary trypsin inhibitor, UTI)对人肝癌HepG2细胞增殖和迁移等肿瘤生物学特性的影响。方法:MTT法检测UTI对肝癌HepG2细胞增殖的影响;Transwell法检测不同浓度UTI对细胞迁移能力的作用;结果:UTI组对肝癌HepG2细胞的增殖无影响(P0.05);与对照组相比较,不同浓度的UTI组均能抑制人肝癌细胞HepG2的体外迁移能力,且呈剂量效应关系,差异有统计学意义(P0.05);结论:UTI能抑制人肝癌细胞HepG2迁移。
关键词:尿胰蛋白酶抑制剂(UTI);肝癌细胞HepG2;增殖;迁移
Effects of urinary trypsin inhibitor (UTI) on the migration and invasion of HEPG2 hepatocellular carcinoma cells in vitro.
Yang Chaowen Luo Jiaxing Luo Weimin
Abstract:Objective: To investigate effects of urinary trypsin inhibitor (UTI) on the proliferation and migration of HepG2 hepatocellular carcinoma cells in vitro. Methods:Effects of UTI on HepG2 cells proliferation was evaluated by MTT assaya; Effect on HepG2 cells migration by UTI was evaluated by Transwell assay. Results:The UTI do not effect the proliferation of HEPG2 cells (P0.05). UTI suppress the migration of HepG2 cells dose-dependantly(P0.05). Conclusions: UTI can suppress the migration of HEPG2 hepatocellular cells.
Key words: Urinary trypsin inhibitor (UTI); Liver hepatocellular carcinoma HepG2 cells; Proliferation; Migration
【中图分类号】Q51 【文献标识码】A 【文章编号】1674-7526(2012)12-0128-02
UTI是从尿液中提取的一种Ⅱ型Kunitz第二结构域的蛋白多糖,对丝氨酸蛋白酶(胰蛋白酶)、透明质酸酶和纤溶酶等多种酶具有抑制作用[1],属于蛋白酶抑制剂,临床上常用于急慢性胰腺炎的治疗。然而近年国内外研究表明,UTI还能抑制多种肿瘤的转移,如卵巢癌、结肠癌、恶性间皮细胞瘤等,但其对肝癌细胞生物学的影响文献报道较少。目前认为抑制肝癌的转移已成为进一步提高肝癌术后生存率和治愈率的难点,在肿瘤转移过程中,肿瘤细胞的增殖和迁移能力尤为重要。因此,本研究通过体外细胞实验研究UTI对HepG2细胞的增殖、迁移的影响,初步探索UTI用于肝癌细胞活性的影响,为下一步研究内在机制奠定基础。
1 材料和方法
1.1 材料与试剂:人肝癌细胞株HEPG2由南华大学医学院病理实验室保存;UTI(批号021004042)购自广东天普生化医药股份有限公司;胎牛血清购自Hyclone公司;高糖DMEM培养液购自美国Invitrogen公司;MTT、二甲基亚砜(DMSO)均购自Sigma公司; Matrigel胶购自美国BD公司;PT-PCR试剂盒购自碧云天公司;Transwell小室购自美国Corning公司,膜孔径8μm;UPA多克隆单克隆抗体购自美国SantaCruz公司。
1.2 细胞培养与UTI配置:HepG2细胞培养于含10%胎牛血清的DMEM高糖培养基中,置于37℃及5%CO 的湿化培养箱中。4-5d传代一次。UTI用培养液配成浓度为10000U/ml的储存液,过滤除菌,-20℃保存,使用时稀释至所需浓度。
1.3 细胞增殖实验:取对数生长期的HepG2细胞按1×104个/孔的密度接种于96孔培养板中。24h后,更换含不同浓度UTI的培养液(600、900、1500U/ml),每组设3个复孔;对照组为空白对照组。培养板继续培养24、48、72h,每天更换相应浓度UTI培
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