高效液相色谱分析技术—方法开发(陈桂良)课件.ppt

流动相常用溶剂的极性和截止波长 由极性可以看出，在反相色谱中，要使出峰时间加快，可增加流动相中的乙腈比例，但要注意分离度的减小；若要使出峰时间减慢，可增加流动相中水的比例，增加水的比例还会引起分离度的增加；两者之间综合来考虑。举例说明 。异丙醇转相时必须用；四氢呋喃使用时注意波长。必须选用色谱级的。 由于甲醇的极限波长为210nm左右，故短波长测定时，最好不要采用甲醇，而用乙腈。 样品稀释用溶剂的选择：测定有关物质时最好选用流动相，避免以溶剂峰的干扰，水往往出倒峰。含量测定时，溶剂依情况而定，有时选用流动相费用太高，或是不易于操作。 进样量最好选用定量环的量，以避免由于进样不准而引起的偏差。定量环可进行更换。 各溶剂截止波长 检测器和检测条件的选择 检测器的选择 检测条件的选择 灵敏度问题 检测器类型 最通用的紫外检测器：注意测定波长较短时，基线有可能会飘；洗柱子时，尽量关闭光源，以延长使用寿命。 二极管阵列检测器：目前使用者越来越多。用于多波长检测、峰纯度测定、对被测定物质进行紫外扫描后选择波长等用途。 荧光检测器：灵敏度更高，对那些μg级的制剂品种，有时适用。但缺点是，基线稳定需平衡时间较长。 示差折光检测器、蒸发光散射检测器、电化学检测器（电导检测器）等。 举例说明 HPLC法测定盐酸氟西汀的有关物质及其胶囊的含量 HPLC法同时测定福辛普利钠片中福辛普利钠及其降解产物福辛普利拉的含量 HPLC法用于苯唑西林钠及其制剂中含量和有关物质的测定 * * * * lines- zoom noise * * * * Polar Endcapping, adding a polar group to the silica surface so that surface can “wet” to use more aqueous mobile phase for hydrophillic interactions Polar Embedded groups- generally within the ligand Phenyl stationary phases will increase the polarity of the stationary phase * Polar-RP… many polar interactions----(Phenyl, polar endcapping, polar embedded group) * Polar-RP… many polar interactions----(Phenyl, polar endcapping, polar embedded group) * * Less hydrophobic retention- usually a short carbon chain and then phenyl group---C2, C3 or C6 * Less hydrophobic retention- usually a short carbon chain and then phenyl group---C2, C3 or C6 * Increased hydrophobic retention with Phenyl-Hexyl compared to polar-RP More polar resolution with the polar rp than pheny-hexyl Reversed elution order for late eluting compounds with both phenyl phases Notice co-eluting peaks on C18 for polar compounds * * Synergi? Fusion-RP 增加极性的选择性同时减少疏水性的分析时间 在水溶液中100%稳定 min 0 2 4 6 8 10 12 14 mAU 0 100 200 300 400 500 VWD1 A, Wavelength=210 nm (S:\HPCHEM\1\DATA\SW1003\TEST0034.D) min 0 2 4 6 8 10 12 14 mAU 0 50 100 150 200 250 300 350 VWD1 A, Wavelength=210 nm (S:\HPCHEM\1\DATA\SW1003\FUSI0046.D) Running Conditions Mobile phase: 75:25 20mM Potassium phosphat