第十章核酸生物化学(二)课件.ppt

第十一章 核酸代谢(二) 核 酸 的 生 物 合 成 主要内容 DNA的生物合成 RNA的生物合成 遗传学的中心法则 DNA通过复制将遗传信息由亲代传递给子代；通过转录和翻译，将遗传信息传递给蛋白质分子，从而决定生物的表现型。 DNA的复制、转录和翻译过程就构成了遗传学的中心法则。 反中心法则 在RNA病毒中，其遗传信息贮存在RNA分子中。 因此，在这些生物体中，遗传信息的流向是RNA通过复制，将遗传信息由亲代传递给子代，通过反转录将遗传信息传递给DNA，再由DNA通过转录和翻译传递给蛋白质，这种遗传信息的流向就称为反中心法则。 信息分子的复制与表达 概念: 复制(replication)： 指以亲代DNA分子 为模板合成出子代 DNA分子的过程。 转录(transcription)： 以DNA分子为模板合 成出与其核苷酸顺序 相对应的RNA的过程。 反转录(reverse transcription)： 以RNA为模板将遗传信息传给DNA的过程。 一、DNA的生物合成 （一）DNA的半保留复制 1、半保留复制假说的提出： 1953年，Watson Crick在DNA双螺旋基础上提出。 DNA复制的假设： 有3种可能： 1）全保留式； 2）半保留式； 3）混合式。 2、实验证明： 方法： 将E.Coli培养在以15NH4Cl为唯一氮源的培养基中生长；提取其DNA ；进行氯化铯密度梯度离心。 再移至14N培养基中生长、提取DNA、离心分析。 结果： 证实了DNA复制时，亲代分子分为二个亚单位（两条链），分别构成子代分子的一半，且经过多代仍保持完整性。 3、意义： 1）半保留复制保证了遗传的稳定性； 2）DNA是处于不断变异和发展之中。 （二）DNA复制的起点和方向 实验：用3H标记的dT 得到含3H的DNA； 放射自显影。 推测：若放射性在两端—双向； 若在一端—单向； 实验证明： 细菌染色体DNA是双向复制，大多是一个起点。 1、复制起点： 原核生物： 1个起点; 真核生物： 多起点； 2、方向： 多为双向 3、复制叉： 细菌为环状DNA复制起始于单个位点， 双向，半保留，每 个复制泡（眼）包 括2个复制叉(DNA 的两条链在起始点分开形成)。 方向：5’→3’ 大肠杆菌E.Coli 大肠杆菌的复制原点叫做oriCoriC起点： 有固定起点； 特殊蛋白识别起点； 起点为100-200bp的区域; 以复制叉形式完成复制。 （三）原核细胞DNA的复制（DNA指导的DNA合成） 1、大肠杆菌的DNA聚合酶 (DNApolymerase,DNApol)： 催化形成新的磷酸二酯键； 有外切酶活性。 1) E.COLi DNA聚合酶Ⅰ 需要原料： 4种dNTP； DNA模板； 与模板互补的一段RNA引物； Mg2+； Zn 2+ （酶活性部位）； DNA聚合酶Ⅰ功能： 催化dNTP加到DNA链的3’-OH末端 （方向5’ →3’） 。 5’ →3’外切酶活性，可切除引物； 3’ → 5’外切酶活性，可纠错； 2) DNA聚合酶Ⅱ: 反应需Mg2+ 、NH4 + ； 反应同酶1,聚合活力很低； 具3’ → 5’外切酶活性； 3) DNA聚合酶 Ⅲ： 主要负责DNA链延伸； 具3’ → 5’外切酶活性； 具5’ →3’外切酶活性 DNA聚合酶Ⅰ DNA聚合酶Ⅱ DNA聚合酶Ⅲ 亚基数目 1（单体酶） ＞1（多亚基酶 ） ＞1（多亚基酶） 5’ 3’聚合活性 + 中 + 很低 + 很高 3‘ 5’外切活性 + + + （保护DNA复制的 忠实性fidelity） 5‘ 3’外切活性 + - + E.COLi的DNA聚合酶 功 能 Ⅰ Ⅱ Ⅲ 5’→3’聚合作用 + + + 5’→3’外切酶作用 + － + 3’→5’外切酶作用　　 + + + 聚合核苷酸数 /min 600 30 9000