HPLC法测定复方穿心莲片中脱水穿心莲内酯的含量.docVIP

HPLC法测定复方穿心莲片中脱水穿心莲内酯的含量 　　[摘要] 目的 用高效液相色谱法测定复方穿心莲片中脱水穿心莲内酯的含量。 方法 采用Dia-monsil C18柱（200 mm×4.6 mm，5 μm），以甲醇-水（（52∶48）为流动相；流速：1.0 mL/min；检测波长：250 nm。 结果 脱水穿心莲内酯的线性范围为0.036～0.328 μg，r = 0.999 8；本品平均回收率为100.04%，RSD值为0.11%。 结论 本法简便、灵敏、准确。 　　[关键词] 高效液相色谱法；复方穿心莲片；脱水穿心莲内酯；含量测定 　　[中图分类号] R927.2 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2013）01（c）-0062-02 　　复方穿心莲片是以穿心莲、路边青药材制成的内服制剂，具有清热解毒、凉血、利湿的功效，用于风热感冒、喉痹等疾病[1]。本文采用HPLC法对制剂中的有效成分脱水穿心莲内酯进行含量测定，所建立的方法准确可靠、专属性强、稳定，可用于该制剂的质量控制。现报道如下： 　　1 仪器与试药 　　仪器：Agilent LC-1260高效液相色谱议（美国）、Agilent LC-1200DAD检测器；AD204-S电子天平；KQ-300DE超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。复方穿心莲片样品（广州白云山和记黄埔中药有限公司，批号：C1D001、C1D002、C1D003），甲醇（色谱纯，天津市大茂化学试剂厂）；水为纯净水；脱水穿心莲内酯对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110854～200306）； 　　2 方法与结果 　　2.1 色谱条件 　　色谱柱：Dia-monsil C18（200 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-水（52∶48）；流速：1.0 mL/min；柱温：25℃；检测波长为250 nm。进样量10 μL，理论塔板数按脱水穿心莲内酯峰计，应不低于2 500[2-4]。 　　2.2 溶液制备 　　2.2.1 对照品溶液的制备 取脱水穿心莲内酯适量，精密称定，加甲醇制成每1 毫升含20 μg的溶液，摇匀，即得。 　　2.2.2 供试品溶液的制备 取本品细粉约0.5 g，精密称定，置50 mL量瓶中，加入甲醇约45 mL，超声处理30 min，取出，放冷，用甲醇定容至刻度，滤过，取续滤液，即得。 　　2.2.3 阴性对照溶液的制备 按处方比例，取缺穿心莲的其他各味药材，按供试品制备方法制成阴性对照溶液。 　　2.3 干扰试验 　　取脱水穿心莲内酯对照品溶液、供试品溶液及缺穿心莲药材的阴性对照溶液各10 μL注入液相色谱仪，记录色谱。从图谱可以看出，在此色谱条件下，脱水穿心莲内酯峰与其他组分峰分离完全，在与脱水穿心莲内酯峰相同的保留时间处，阴性对照无干扰，见图1、2、3。 　　2.4 线性关系考察 　　精密称取脱水穿心莲内酯对照品11.40 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密吸2 mL至25 mL容量瓶中，用甲醇溶液稀释至刻度，分别进样2、6、10、14、18 μL，测定峰面积，以脱水穿心莲内酯浓度（μg）为横坐标（X），峰面积积分值（A）为纵坐标（Y），计算脱水穿心莲内酯回归方程为：Y = 43.990X + 0.033 2，r = 0.999 8。结果表明，脱水穿心莲内酯在0.036～0.328 μg范围内线性关系良好。 　　2.5 精密度试验 　　精密吸取脱水穿心莲内酯[（对照品溶液（0.018 mg/mL]10 μL，注入高效液相色谱仪中，平行测定6份，平均峰面积为430.278，求出相对标准偏差，RSD = 0.90%，结果表明精密度良好。 　　2.6 稳定性试验 　　取本品（批号：C1D002）约0.5 g，研细，精密称定，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，吸取供试品溶液，分别在0、4、8、16、24 h测定1次。平均峰面积为428.63。结果表明，RSD值为1.1%，供试品在24 h内基本稳定。 　　2.7 重复性试验 　　取6份本品（批号：C1D002），每份约0.5 g，精密称定，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，分别精密吸取供试品溶液各10 μL，测定脱水穿心莲内酯峰面积，结果显示，平均峰面积为420.640，平均含量为0.964 mg/片，RSD值为0.70%，表明重复性良好。 　　2.8 加样回收试验 　　取已知含量（3.419 mg/g）的本品（批号C1D002）5份，每份约为0.25 g，精密称定，分别精密加入脱水穿心莲内酯对照品（0.902 mg/mL）1 mL，按供试品溶液的制备方法操作，计算回收率。结果表明，本品的平均回收率为1