分子遗传学3纸板课件.ppt

* * * * * * * * * * * * 进行滚环复制的DNA分子类型： 真核rDNA的扩增； 细菌F因子DNA的转移； λ噬菌体裂解途经的复制； φX174、M13、 G4等病毒的复制； 如：φX174为单链环状DNA噬菌体，为单正+链，其复制第一步是合成一条互补的负-链产生双链环；第二阶段复制进行滚环复制。 三、线状DNA复制起始及末端补齐 线性双链DNA的复制有的是从一端开始的，称为末端起始复制。如腺病毒（Adenovirus）、φ29 DNAs、脊髓灰质病毒（poliovirus)。 腺病毒DNA全长35937 bp,线性双链； 两端各有反向重复顺序103～162bp，两末端各有50bp为复制起点； 其复制是以单链置换（strand displacement）形成一个大的茎环或叫平锅形结构来进行的。 线性双链DNA复制的末端补齐： 腺病毒利用末端蛋白代替RNA引物； 真核生物染色体的末端依赖端粒酶的特殊功能； 第五节 真核细胞DNA的复制 真核细胞中染色体DNA的复制是通过许多独立的复制子（复制元）来完成的，每个复制子都有固定的复制起点，采用双向复制； 染色体DNA为线性分子，各复制子不一定同时活化，但在细胞的一个分裂周期内只能复制一次； 复制的调控机制尚不清楚； 对真核细胞DNA的复制研究常以感染宿主细胞的病毒（SV40）复制为基础，因为两者的复制有相似之处。 * （一）真核生物复制的起始与原核基本相似 真核生物每个染色体有多个起始点，是多复制子复制。复制有时序性，即复制子以分组方式激活而不是同步启动。 复制起始点比原核生物短，富含AT，称为自主复制序列（ARS，autonomous replication sequence）。 * 多起点、双方向 真核生物： 从起点开始，以双向等速进行，一个DNA分子上有许多个特定的复制起点。 * 真核生物所含的DNA聚合酶种类更多：真核生物DNA pol 已发现有5种，分别命名为： DNA-pol ? 起始引发，有引物酶活性。 延长子链的主要酶，有解螺旋酶活性。 参与低保真度的复制 ,应急修复。 在复制过程中起校读、修复和填补缺口的作用。 在线粒体DNA复制中起催化作用。 DNA-pol ? DNA-pol ? DNA-pol ? DNA-pol ? * 增殖细胞核抗原(PCNA)——在复制起始和延长中起关键作用。PCNA为同源三聚体，具有与E.coli DNA 聚合酶Ⅲ的β亚基相同的功能和相似的构象，即形成闭合环形的可滑动DNA夹子，在RFC的作用下PCNA结合于引物－模板链；并且PCNA使polδ获得持续合成能力。PCNA水平也是检验细胞增殖的重要指标。 * （二）真核生物复制的延长发生 DNA聚合酶α/δ转换 DNA-pol α— 引物酶活性，催化合成引物； DNA-pol ? — 解螺旋酶活性，催化合成子链 引物合成后，DNA-pol ?在PCNA的协同下将DNA-polα置换出，然后催化合成子链。 冈崎片段长度约为n×135bp(一个核小体所含DNA的量) 随从链合成过程中DNA-polα与DNA-pol ? 之间的转换频率大。 * 3? 5? 5? 3? 领头链 3? 5? 3? 5? 亲代DNA 随从链 引物 核小体 真核生物复制叉的延长： 领头链的连续复制也只限于半个复制子的长度 * （三）复制的终止端粒酶参与解决染色体末端复制问题 1.去除引物——RNA酶、DNA酶 2.把DNA连接成完整的子链 复制终止阶段需： * 复制中岡崎片段的连接，复制子之间的连接(与原核生物类似) 染色体两端DNA子链上最后复制的RNA引物，去除后留下空隙。(与原核生物不同) * 真核生物染色体DNA是线形结构。 线性DNA在复制完成后，其末端由于引物RNA的水解可能出现缩短。 * 端粒（telomere）是指真核生物染色体线性DNA分子末端的结构部分，通常膨大成粒状。 真核生物通过端粒的特殊复制方式来解决复制中DNA逐渐变短的问题 * 功 能: 维持染色体的稳定性 维持DNA复制的完整性 端粒的结构特点: 由末端线性DNA序列和蛋白质构成。 末端DNA序列是多次重复的富含G、T碱基的短序列。 TTTTGGGGTTTTGGGG… * 一种RNA-蛋白质复合体，它可以其RNA为模板，通过逆转录的方式对末端DNA链进行延长。 端粒酶(telomerase) * 端粒酶RNA (human telomerase RNA, hTR) 端粒酶协同蛋白(human telomerase associated protein 1, hTP1) 端粒酶逆转录酶(human telomerase rever