抑郁状态对大鼠胃溃疡愈合质量及EGF、EGFR的影响.docVIP

抑郁状态对大鼠胃溃疡愈合质量及EGF、EGFR的影响 　　【摘要】 目的 探讨抑郁状态对实验大鼠胃溃疡愈合质量及EGF、EGFR的影响及作用机制。方法 除空白对照组大鼠外，剩余动物于乙酸诱导胃溃疡模型成功后，随机分为模型对照组及抑郁状态组；给予抑郁状态组大鼠慢性不可预见性应激刺激21d，空白对照组及模型对照大鼠正常饮水，饮食，不予任何刺激。21d后杀检，肉眼及镜下观察溃疡愈合情况，检测血清、胃组织EGF及EGFR的含量。结果 镜下观察空白组大鼠胃黏膜完好无损，模型对照组大鼠胃溃疡愈合情况较抑郁状态组良好。模型对照组大鼠EGF及EGFR的含量均高于抑郁正常组（P0.05）。结论 抑郁状态可降低胃溃疡愈合质量，其作用机制与抑制EGF及EGFR作为保护性因子的表达有关。 　　【关键词】 抑郁状态；胃溃疡；表皮生长因子；表皮生长因子受体 　　胃溃疡（gastric ulcer，GU）是内科常见病，多发病。目前溃疡病的近期愈合率显著提高，但复发率仍居高不下。溃疡愈合高质量组与低质量组，1年溃疡复发率分别为4.5%和75%[1]。因此，提高溃疡愈合质量，对于缓解患者痛苦，降低溃疡复发率等都具有十分重要的意义。抑郁症是一种以显著而持久的心境低落为主要临床表现的精神疾病，给患者带来极大的痛苦和心理伤害[2]。随着生活节奏的日益紧张，社会工作竞争的日益增加，抑郁症的患病率已在逐年上升[3]。现代医学认为胃溃疡形成后，如果不良情绪刺激仍未解除，病情会进一步加重[4]。本实验通过观察大鼠胃溃疡愈合情况及检测胃组织中表皮生长因子（epidermal growth factor，EGF）及表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）水平，欲探讨抑郁状态对实验大鼠胃溃疡愈合质量的影响机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 动物 SPF级Wistar大鼠52只，雌雄各半，体重（200±30）g，由甘肃中医学院实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK（甘）2011-0001-0001166。 　　1.2 试剂与仪器 冰乙酸，分析纯，w/%≥99.5，天津市百世化工有限公司产品，批水合氯醛，分析纯AR，天津欧博凯化工有效公司产品，批EGF试剂盒，购自北京中杉金桥生物技术有限公司产品，批。ES-1000E电子天平，长沙湘平科技发展有限公司生产；TGL-13低温电动离心机，金坛市富华仪器有限公司产品；HY-4气浴恒温振荡器，金坛市富华仪器有限公司产品；Bio-rad 680酶标仪，美国BIO-RAO产品；Reiehert-Jung 820-Ⅱ型超薄切片机，德国Reiehert-Jung公司产品；OYLMPUS生物显微镜，日本OLYMPUS光学仪器有限公司产品。 　　1.3 胃溃疡模型的建立 冰乙酸诱导大鼠胃溃疡模型的制备。随机数字表法分出10只大鼠作为空白对照组动物，其余42只大鼠参照文献[5]的造模方法。剑突下0.5 cm纵向切开腹壁约2 cm，自肝后找到胃，暴露胃体于外并在胃前壁体窦交界处靠胃窦侧浆膜面，用微量注射器注入0.03 mL冰乙酸，然后将胃还纳入体内，逐层缝合，碘伏消毒皮肤创口。 　　1.4 动物分组 确定胃溃疡模型制备成功后，按随机数字表法将剩余的40只大鼠分为模型对照组及抑郁状态组2组，每组20只，均标准饲料喂养，自由饮水。 　　1.5 抑郁状态模型的建立 采用Willner[6]不可预测性长期温和应激刺激造模方法并略加改进，抑郁状态组大鼠接受21 d应激刺激，包括昼夜颠倒、禁食24 h、禁水24 h、4℃冷水强迫游泳5 min、40℃高温环境1 h、倒立束缚2 min、夹尾1 min、匀速震荡5 min、垫料潮湿24 h、单笼饲养24 h，以上10种不同的应激因子顺序随机，每天抽取2-3种刺激，同种刺激不连续出现，使动物无法预料刺激的发生。空白对照组及模型对照大鼠正常饮水，饮食，不予任何刺激。 　　1.6 标本采集与处理方法 在抑郁状态组大鼠末次应激刺激后，所有大鼠禁食不禁水24 h，腹主动脉采血5 mL于真空管内，倾斜放置30 min后，放入低速离心机，以3000 r/min，离心30 min，取上清2 mL，入-20 ℃冷藏；剥离胃，结扎幽门，于十二指肠和食管处结扎胃，100 g/L 甲醛10 mL至贲门注入胃腔，固定30 min；以溃疡病灶或溃疡瘢痕平行于胃长轴方向的最长径为中心取材，100 g/L 甲醛固定，备用制作病理切片。于溃疡周围取一块组织放入生理盐水中冲洗，吸干，用电子天平称取0.3-0.4 g，加入9倍量的生理盐水，低温快速匀浆制成100 g/L 的组织匀浆液，将匀浆液移入离心管中，3000