第5次：培养物的观察和检测方法060209课件.pptVIP

培养物的观察检测方法 4.免疫细胞化学技术 4.2 常用的显色标记物 4.2.4 胶体金与免疫金银技术 胶体金(colloid gold)即金的水溶液，为最常用的金属标记物。用胶体金作标记物的ICC称免疫金技术。 免疫金技术和免疫荧光技术一样，免疫染色后即可于镜下观察，无需标记物的显示程序。 供光镜观察的免疫金染色使用的胶体金颗粒直径通常较大，为20nm，镜下呈粉红色。体积大的金颗粒与抗体的结合不十分稳定，这便降低了免疫金方法的敏感度。 培养物的观察检测方法 4.免疫细胞化学技术 4.2 常用的显色标记物 4.2.4 胶体金与免疫金银技术 尔后发明的免疫金银技术则有效地避免了这一缺陷。 其原理是：使已在抗原位置沉积的金颗粒发挥催化作用，促进银离子被氢醌（hydroquinone）还原为银原子，后者围绕金颗粒形成一层银壳；银壳本身也具有催化作用，使更多的银离子还原沉积，银壳便增大，镜下呈黑色颗粒。这样抗原的存在部位便显著放大。因而免疫金银技术可以使用与抗体结合牢固的5～10 nm胶体金。 据认为，免疫金银技术敏感度高于PAP法。 4.3 免疫细胞化学方法及标记物的选择 培养物的观察检测方法 4.免疫细胞化学技术 理想的方法应是敏感、简便、快速以及经济，但主要取决于所研究的标本及其抗原的分布与含量。 一般来讲，估计抗原含量中等以上的标本可应用间接法或SPA法。如果有荧光显微镜